钟剑锋 谢宇宝 蔡汇明 何家豪 杨咏祺 陈晓珺 崔明筠 朱钦昌 付开聪 贺震旦*

    1.深圳大学医学部药学院，广东省天然小分子创新药物工程技术研究中心，深圳市新型天然保健品研究重点实验室，广东 深圳 518071；2.云南省普洱市民族传统医药研究所，云南 普洱 665000

    痛风是常见多发的代谢性风湿病，我国痛风发病率约为1%～3%[1]，痛风临床表现为高尿酸血症，常与多种疾病伴发，严重者易导致肾衰竭危及生命[2]。尿酸由黄嘌呤氧化酶催化黄嘌呤生成[3]，尿酸催化生成过程中还会产生大量超氧阴离子和过氧化氢等自由基，与细胞损伤、炎症等密切相关[4]。因此，抑制黄嘌呤氧化酶的活性是痛风药物研究的一个重要靶点。临床常见的黄嘌呤氧化酶抑制剂主要有别嘌呤醇和非布索坦，但都伴有严重的副作用[5-6]，寻找毒副作用小的中药活性成分具有重要的意义和研究前景。

    秦盾祛痛风胶囊(原名尿酸消胶囊)是哈尼族民间中药制剂，主要含有秦皮、盾翅藤、虎杖、肾茶等成分，主治尿酸过高引起的痛风[7]。当地患者使用疗效显著、副作用低，在临床样本观察中，痛风早期患者服用该药物两月后基本恢复正常，部分痛风晚期典型病例服用一或两个疗程后，尿酸值由800显著降低至500左右。但由于临床观察样本少，且具体的降尿酸作用和机制尚未阐明，无法打破该药的地方局限性。本研究以黄嘌呤氧化酶为靶点，利用紫外分光光度法[8]，对秦盾祛痛风胶囊的水提和醇提物进行黄嘌呤氧化酶抑制活性和体外细胞毒性研究，并进行HPLC分析，初步探讨其降尿酸的作用和机制，为该民族药的开发和应用提供实验支撑和依据。

    1 材料

    1.1 药品和试剂 秦盾祛痛风胶囊(TFCAP)购自普洱市民族医院，批号：滇药制字(Z)20140010J；黄嘌呤和黄嘌呤氧化酶购自北京华夏远洋科技有限公司；别嘌呤醇和尿酸购自北京华威锐科化工有限公司；标准品秦皮甲素、虎杖苷、熊果酸购自云南西力生物技术股份有限公司；cck8试剂盒购自深圳莱伯生物科技有限公司。

    1.2 仪器 旋转蒸发仪V-100(瑞士BUCHI公司)；真空冷冻干燥机LGJ-12S(北京松源华兴生物技术有限公司)；酶标仪Synergy H1(美国BioTek公司)；高效液相色谱仪LC-2030C(日本Shimadzu公司)

    1.3 细胞株 人大肠癌细胞(HCT116)、人宫颈癌细胞(Hela)、人肌肉横纹肌瘤细胞(RD)、和非洲绿猴肾细胞(Vero)主要来源于实验室课题组培养分离所得；人近端肾小管上皮细胞(HKC)购自北京北纳创联生物技术研究院 ......