刘康连 庞云娟* 龙文洲 颜金兰 庞兰英 莫海涛

    1.玉林市食品药品检验检测中心,广西 玉林 537000;2.桂林医学院，广西 桂林 541004;3.广西子持医药科技有限公司，广西 南宁 530299

    抗风湿止痛酊和抗骨质增生酊均为玉林市中医医院院内制剂，为瑶方外用液体制剂，疗效确切，可广泛应用于临床。目前中药外用酊剂疗效显著，前景广阔[1], 对其进行微生物限度的检查是控制药品质量的重要检查项目之一，控制其质量是保证临床安全用药的前提[1-4]。本研究根据其给药途径和处方，按照《中华人民共和国药典》(以下简称《中国药典》)2020年版四部通则1107的有关规定[4]，对其进行需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数进行计数方法的适用性试验以及控制菌——金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌的检查的适用性试验，建立抗风湿止痛酊和抗骨质增生酊的微生物限度检查法并加以验证，保证微生物限度检查方法的科学性、可靠性和准确性，为确保其微生物限度检查指标符合要求，更好地控制其质量提供标准依据。

    1 材料与仪器

    1.1 实验菌株 枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501]，金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]，铜绿假单胞菌[CMCC(B)10104]，白色念珠菌[CMCC(F)98001]，黑曲霉[CMCC(F)98003]，大肠埃希菌[CMCC(B)44102]，从广东环凯微生物科技有限公司购买西林瓶冻干粉菌种，实验室进行复活传代并制备成甘油冻存管保存。其中铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、黑曲霉使用的是第二代，枯草芽孢杆菌、白色念珠菌使用的是第三代，金黄色葡萄球菌使用的是第四代。

    1.2 培养基与试剂 胰酪大豆胨琼脂培养基TSA、胰酪大豆胨液体培养基TSB、沙氏葡萄糖琼脂培养基SDA，沙氏葡萄糖液体培养基SDB、pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、甘露醇氯化钠琼脂培养基、溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基、(北京陆桥技术有限责任公司所产)；0.9%无菌氯化钠溶液(广东光华科技股份有限公司)、吐温80(天津市大茂化学试剂厂)。

    1.3 仪器 霉菌培养箱(广东省医疗器械厂，型号LRH-150-M)，SPX-150F-Ⅱ型生化培养箱(上海龙跃仪器有限公司)，生物安全柜(苏州安春游空气技术有限公司，型号BHC-1300HA2)，立式压力蒸汽灭菌器(雅马拓科技贸易有限公司，型号SQ810C)，真空泵两头套装(密理博Milliflexplus)S25型圆周振荡器(德国IKA)，电动助吸器Eppendorf Easypet 3(德国Eppendorf)、艾本德移液器(100～1000 μL ......