张国英 耿丹丹 迟晓峰

    1.青海省药品检验检测院，青海 西宁 810016；2.国家药品监督管理局中药(藏药)质量控制重点实验室，青海 西宁 810016；3.青海省中藏药现代化研究重点实验室，青海 西宁 810016；4.河北医科大学基础医学院，河北 石家庄 050017；5.中国科学院西北高原生物研究所，青海 西宁 810008

    上呼吸道感染为鼻腔、咽部和喉部炎症的总称，包括普通感冒、流行性感冒、咽炎等，其主要由多病毒(如鼻病毒、流感病毒、冠状病毒和腺病毒等)感染引起[1]。由于上呼吸道感染中巨噬细胞的异常激活和细胞中活性氧(reactive oxygen species，ROS)信号密切相关，而病毒感染和缺氧引起细胞损伤的机制也和活性氧堆积引起氧化性损伤有关，因此，在常规治疗中常辅以抗氧化剂进行治疗[2]。研究[3]发现，抗氧化剂可能通过抑制ROS信号依赖的巨噬细胞过度活化、预防缺氧性组织损伤以及减少病毒带来的细胞损伤。因此，发掘临床上应用的治疗上呼吸道感染的中藏药材中的天然抗氧化活性成分，有望对上呼吸道感染产生理想的辅助治疗作用，为临床治疗提供新的思路。

    长期以来，国内中药效应物质基础研究的主流模式主要是在化学成分提取、分离和结构鉴定基础上利用药理模型对得到的纯化合物进行生物活性测试。这样的研究方法阐明了一些中药的效应物质基础，然而该方法费时费力，且原药材用量较大[19]。近年来，国内外有不少学者建立了中药药效物质基础的生物活性筛选-色谱在线分析方法(如抗氧化剂[20]、乙酰胆碱酯酶抑制剂[21]、α-葡萄糖苷酶抑制剂[22]等)，能够使效应成分的分离与筛选相结合，克服以往先从中药中分离单体或有效部位，再分析其药效，致使成分分离与效应筛选脱节的弊端，大大提高了天然植物活性化合物筛选和鉴定的效率。

    基于此，本研究采用HPLC-DPPH-MS/MS在线抗氧化活性筛选体系，对大花龙胆中的抗氧化活性成分进行快速筛选与鉴定，以期为揭示藏药大花龙胆的活性物质基础提供基础数据。

    1 材料

    1.1 主要仪器 本研究所用主要的仪器包括Agilent 1100 HPLC-MSD液相色谱质谱联用仪(美国Agilent公司)；Agilent 1260高效液相色谱仪(美国Agilent公司)；AG135型精密电子天平(瑞士Mettler Toledo公司)；KQ-100E型超声波清洗仪(昆山超声仪器有限公司)；优普UPE-Ⅱ-40 L型超纯水机(四川优普超纯科技有限公司)；IKA旋转蒸发仪(德国IKA公司)；定比分流阀(美国IDEX Health &Science 公司)；NP7000半制备色谱色谱仪(江苏汉邦科技有限公司)；Varian INOVA 600M 核磁共振谱仪(美国Varian公司) ......