陈 亮，聂平平

    福州市中医院，福建 福州 350001

    钩吻，又名断肠草、大茶药、野葛等，为马钱科植物胡蔓藤Gelsemiumelegans(Gardn.etchamp) Benth.的全草，是有毒植物，在我国主要分布在我国浙江、福建、广东、广西、贵州、云南等地[1]。钩吻具有破瘕积的功效[2]，现代药理研究[3]发现钩吻具有镇痛、抗炎、抗肿瘤等作用。曾有医者将钩吻总生物碱制成注射剂应用于临床治疗癌性疼痛取得一定疗效[4]，钩吻生物碱的毒性也对其临床应用带来一定限制，也需要进一步研究相关作用机制，以便能够更好地应用于临床。笔者前期研究发现钩吻中提取出的常绿钩吻碱具有较强抑制人结肠癌细胞HT-29增殖的作用，但是具体机制尚未明确。本研究利用MTT实验、DAPI染色及western-blot等研究方法，从Bcl-2/Bax途径诱导细胞凋亡的角度出发，探讨常绿钩吻碱抗结肠癌作用的机制。

    1 材料

    1.1 药物与细胞 常绿钩吻碱，由昆山远慕生物技术有限公司提供(纯度>99%，货号YM-0065)，配制前用二甲基亚砜(DMSO)溶液配制成5 mg/mL的母液，于4 ℃保存待用。人结肠癌HT-29细胞株，由江苏凯基生物技术股份有限公司提供(货号KGG3225-1)。

    1.2 试剂和仪器 南美胎牛血清(美国Hyclone公司，货号SV30087.02)；双抗青链酶素(10000units/mL，10000μg/mL链霉素。美国Hyclone公司，货号SV30010)；McCoys’5A液体培养基(武汉博士德公司，货号PYG0026)；胰蛋白酶-EDTA(美国Hyclone公司，货号SH30042.01)；二甲基亚砜(DMSO)溶液(北京索莱宝公司，货号D8371)；噻唑蓝(MTT)干粉(江苏凯基公司，货号KGH3101-1)；细胞凋亡DAPI染色剂试剂盒(江苏凯基公司，货号KGA215)；RIPA细胞裂解液(上海碧云天公司，货号P0013B)；BCA蛋白浓度测定试剂盒(上海碧云天公司，货号P0011)；一抗稀释液(上海碧云天公司，货号P0023A)；二抗稀释液(上海碧云天公司，货号P0023D)；SDS-PAGE凝胶配制试剂盒(上海碧云天公司，货号P0012A)；SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(上海碧云天公司，货号P0015)；超敏ECL化学发光试剂盒(上海碧云天公司 ......