王文祎 赵卫涛 孙 希 杨金申 杨瑶珺*

    1.北京中医药大学中药学院，北京 102488；2.华治医药(云南)有限公司，云南 昆明 650199

    中药水蛭为水蛭科动物蚂蟥(宽体金线蛭，WhitmaniapigraWhitman.)、水蛭(日本医蛭，HirudonipponicaWhitman.)或柳叶蚂蟥(尖细金线蛭，WhitmaniaacranulataWhitman.)的干燥全体[1-2]；菲牛蛭为医蛭科动物菲牛蛭(马尼拟医蛭，PoecilobdellaManillensisLesson.)的干燥全体[2-3]，被《云南省中药材标准》(云YNZYC-0357-2013)和《广西壮族自治区瑶药材质量标准》[4](DYB45-GXYYC0106-2021)收录，其冻干粉炮制品又被《云南省中药饮片标准》(云YBPZ-0199-2013)[5]收录。以上4种水蛭均有破血痛经、逐瘀消癥等功效，是我国目前使用较为普遍的活血化瘀中药品种。

    为评价水蛭活血化瘀能力，中国药典和地方标准均以抗凝血酶活性作为评价指标，其含量测定方法均参照1970年Markwardt报道的凝血酶测定法[6]制定，其原理是根据1个单位水蛭素抗凝血酶活力中和1个单位凝血酶测得样品中所含水蛭素量。该方法简单经济、反应迅速、终点敏锐。但对于终点判断的主观性较强，导致其准确度和重复性不够理想。万明等[7]提出以白瓷板作为滴定载体，其终点结果更易观察；刘义梅等[8]通过两种方法的对比实验，认为白瓷板滴定法结果更为准确，且样品浓度、凝血酶浓度、滴定间隔时间等因素对于检测结果均有影响。张利等[9-10]考察了待测样品提取方式、提取温度、供试液pH值等因素对结果的影响，且通过限定反应时间。滴定后搅动次数更精细化了滴定操作过程细节以提升实验结果的准确性和客观性。而云南省食品药品监督管理局在2022年10月发布的《菲牛蛭冻干粉中药饮片炮制规范征求意见稿》中，关于菲牛蛭冻干粉抗凝活性物质的滴定载体也由药典的试管修改为白瓷板。以上一系列的研究与改进均说明药典标准滴定方法，影响其结果的因素较多，改进的空间较大。

    本实验以宽体金线蛭药材和菲牛蛭冻干粉为样品，参照《中国药典》和云南地标的滴定法，以及云南2022年发布的“征求意见稿”改进后的白瓷板法，对两种滴定方法进行考察，并对其反应现象进行分析。

    1 仪器与材料

    1.1 仪器 数显恒温水浴锅(HH-4，上海力辰邦西仪器科技有限公司)；电子天平(FA2004 d=0.0001 g，上海浦春计量仪器有限公司)；pH值测量仪(PH-100 ......