陆佳伟,贾俊海,张 锋,韩 春

    对于缺血再灌注损伤的保护作用,早在 1986年 Murry 等[1]就首次提出缺血预处理这种经典的器官保护方法,但由于预处理是在缺血前应用,而临床中的缺血往往是未知的,所以预处理的这种局限性使得其未能在临床上真正地推广和应用。2003年,Zhao等[2]又提出了缺血后处理 (ischemic postconditioning,IPC)的概念,但缺血后处理是在再灌注前即刻进行数次、短暂的缺血再灌注 (ischemia-reperfusion,I/R),其本质具有侵害性,于是近两年人们又考虑到一种新的缺血保护策略,即药物后处理 (pharmacological postconditioning)。药物后处理是缺血后处理研究的深入,是一种利用药物干预的缺血保护措施[3]。但目前仍有许多问题困扰着我们:是否有种属的差异、最佳后处理方式 (麻醉药浓度、持续时间)和时机 (开始干预和结束时间)的选择、远期结果的评估以及进一步明确其作用机制等。本实验将主要研究不同剂量维生素 C后处理对肾缺血再灌注损伤的影响及核因子 -κB亚基 p65亲和肽 (NF-κBp65)、一氧化氮 (NO)在肾缺血再灌注损伤中的相关机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料 体质量 240～250 g的健康成年雄性 SD大鼠 30只(江苏大学实验动物中心提供)。超氧化物歧化酶 (SOD)、丙二醛 (MDA)、血尿素氮 (BUN)、肌酐 (Cr)和 NO试剂盒(由南京建成生物工程研究所提供)。兔 NF-κBp65多克隆抗体、DAB显色试剂盒、即用型 SABC染色试剂盒 (由武汉博士德生物工程有限公司提供)。维生素 C注射液 (无锡市第七制药有限公司)。UV2754分光光度计 (上海第三分析仪器厂)。

    1.2 方法

    1.2.1 实验分组与模型制备 (1)实验分组:将 SD大鼠随机分为 5组,每组6只。①假手术组 (Sham组);②肾脏缺血再灌注处理组 (RIR组);③低剂量维生素 C后处理组 (LVc-PO组);④中剂量维生素 C后处理组 (MVcPO组);⑤高剂量维生素 C后处理组 (HVcPO组)。 (2)模型制备:实验动物术前禁食 12 h,自由进水。将大鼠用 30 g/L戊巴比妥钠腹腔注射麻醉,去毛、固定,沿上腹部正中线逐层切开,显露和游离肾脏,仔细分离肾蒂,保护输尿管。用无损伤动脉夹夹闭肾蒂,肾脏颜色变为暗红色可确认为肾脏血流阻断,造成肾缺血,而后松开动脉夹,肾脏由暗红色转为鲜红色可确认为血流恢复 ......