秦文娇,顾静文,许小平,陈 洁,陈波斌,林果为

    淋巴瘤是血液系统常见的肿瘤之一。靶向治疗药物联合细胞毒药物是目前淋巴瘤治疗的热点。其中 CD20单抗 (Mebthera,Rituximab,利妥昔单抗,美罗华)已经在临床有较多应用[1],它通过多种作用方式诱导淋巴瘤细胞凋亡,如抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用 (ADCC)和补体依赖的细胞溶解作用 (CDC)。有文献推测 CD20单抗也可能直接诱导 B淋巴细胞凋亡,但具体机制目前尚不清楚。Bcl-2基因 (B-cell lymphoma/Leukemia gene,B细胞淋巴瘤/白血病 -2基因)是凋亡因子的信号转导途径的调节点,其表达产物可抑制 B淋巴细胞凋亡的发生。80%低度恶性和 30%中度恶性淋巴瘤 Bcl-2基因有 t(14∶18)染色体移位,从而导致 Bcl-2蛋白的过表达。Bcl-2过表达的淋巴细胞是日后复发的根源,而且可导致对多种化疗药物的耐药。临床研究显示抗 Bcl-2药物可以增加 CD20单抗的疗效,两种药物有协同作用。CD20单抗的应用,是否也会影响 Bcl-2蛋白通路的表达,从而引起细胞凋亡的改变,目前尚未有详细的实验室研究的报道。CD20有多个磷酸化位点,包括细胞内主要的信号转导系统之一——丝裂素活化的蛋白激酶 (mitogen-activated protein kinases,MAPK)。p38 MAPK信号转导通路可在许多肿瘤细胞凋亡中发挥作用,其活性增加可保护 B淋巴细胞免于凋亡。但是这一通路是否受 CD20单抗的调节,目前亦尚无文献报道。因此,本研究通过观察不同浓度 CD20单抗对 B淋巴细增殖的影响及其作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料 Raji和 Namalwa淋巴瘤细胞株均来自于中国科学院细胞库。培养于 RPMI 1640培养基至对数生长期。

    1.2 细胞活力测定 将 Raji和 Namalwa细胞株加入终浓度为12.5μmol/L、25.0μmol/L和 50.0μmol/L的 CD20单抗中,以 PBS作为空白对照药物作用不同时间 (12、24、48、72 h);弃上清,加入 MTT 20 l培养 4 h;加二甲亚砜 100μl,于 490 nm波长处测定吸光度值,计算细胞增殖抑制率 ......