高 飞,黄庆晖,黄越玲,孙卫文,戴丽军,沈岩松,李敏雄,陈盛强,刘忠民

    癫痫是神经系统常见病之一,是由多 种病因引起的慢性脑性疾病,以大脑神经元突发性异常放电所致的突然、反复和短暂的大脑功能障碍为特征。近年来研究表明,癫痫病灶处的能量、氧及血流量有相应的变化,特别是缺氧和缺血后再灌注损伤,可产生大量的氧自由基,并形成自由基连锁反应。氧自由基能攻击多不饱和脂肪酸 (PUFA)引发脂质过氧化作用,生成大量的丙二醛 (MDA)及新的氧自由基等复杂产物,继而引起细胞代谢和功能障碍,参与癫痫对脑的损伤[1-2]。与此同时,一氧化氮 (NO)通过介导谷氨酸(GLU)从突触前膜释放后,GLU作用于突触后膜上的 GLU离子型受体——N-甲基 -D-天冬氨酸受体 (NMDAR),使Ca2+通道开放,Ca2+内流,从而参与了癫痫点燃的过程。柴胡桂枝汤出自 《伤寒论》,是小柴胡汤和桂枝汤的合方,由柴胡、桂枝、黄芩、半夏、芍药、生姜、大枣、甘草组成,属于治疗太阳和少阳并证的方剂,主要用于太阳少阳合并引起的发热微恶寒、肢节烦痛、微呕、心下支结等症。随着对柴胡桂枝汤研究的深入,大量文献报道,柴胡桂枝汤可通过增强 γ-氨基丁酸 (GABA)介导的抑制作用,来调节脑内兴奋性神经递质和抑制性神经递质含量的平衡[3-4],以降低癫痫发作次数;此外,柴胡桂枝汤具有稳定细胞膜结构,抑制自由基的产生,从而起到抗氧化及延缓衰老的作用。为进一步探讨柴胡桂枝汤的抗癫痫、抗氧化作用的机制,本实验拟用 Fmr1基因敲除小鼠作为模型,观察其用药前后行为学改变及脑组织超氧化物歧化酶 (SOD)活性和 MDA、NO水平的变化。

    1 材料与方法

    1.1 实验药物 柴胡桂枝汤挥发油,应用超临界二氧化碳 (CO2)萃取技术从柴胡桂枝汤中提取,萃取釜压力 20 MPa,温度 30℃;解折釜Ⅰ压力 12 MPa,温度60℃;解折釜Ⅱ压力 60 MPa,温度 40℃。

    1.2 实验动物 Fmr1基因敲除型 (KO)纯合子 (-/-)及其野生型 (WT)纯合子 (+/+)FVB近交系小鼠,由荷兰伊拉斯塔斯大学细胞生物学及遗传学研究中心 Oostra BA教授惠赠,广州医学院实验动物中心饲养及繁殖。实验动物的操作及饲养均符合广东省及广州医学院实验动物管理饲养条例,遵循人道原则。

    1.3 实验试剂与仪器 (1)试剂:SOD、MDA、NO测定试剂盒 (南京建成生物工程研究所);(2)仪器:Bio-rid酶标仪、低速离心机、旷场分析箱。旷场分析箱的制作:用一块黑色胶板做成一个边长为 72 cm的正方形,用胶纸作线条分成 16个边长为 18 cm的正方形,该板中心作一个边长为 18 cm的正方形,在该板边缘 2 cm处围成一个边长为 68 cm的正方形,从边缘到中心小正方形依次命名为第一区、第二区、第三区、第四区,第四区也叫中央区 ......