国建飞,杨立伟,高志明,何 明,白世祥,施 靖

    肿瘤的细胞过继免疫治疗日益受到重视。成熟的树突状细胞 (dendritic cell,DC)是体内功能最强的、最有效的抗原递呈细胞。肿瘤引流区淋巴结 (tumor-draining lymph node,TDLN)含有丰富的淋巴细胞,由于其特殊的位置,又含有较多的已摄取肿瘤抗原的树突状细胞,TDLN可以成为一种较好获得的对肿瘤细胞有很强杀伤作用的淋巴细胞潜在来源。本研究通过建立人食管癌裸鼠模型,探索 TDLN在体内对食管癌细胞的杀伤作用。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物 SPF级 BALB/C裸鼠 30只,3～4周龄,体质量 14～17 g,雄性,购于中国医学科学院动物中心,实验动物质量合格证明号是 48678。饲养室内恒温、恒湿,定期紫外线照射,鼠笼、垫料、饮水、饲料均高压消毒。

    1.1.2 肿瘤标本 取自河北医科大学第四医院胸二科食管中段癌手术患者,男性,65岁。临床病理分期:T3N1M0,中分化鳞状细胞癌。术前未行放、化疗。

    1.1.3 TDLN细胞 术中取同一患者 TDLN制成细胞悬液培养7 d获得。

    1.2 方法

    1.2.1 TDLN细胞的培养和食管癌细胞抗原的制备 手术时无菌摘取2～3个无明显转移的淋巴结,用 D-Hank′s液冲洗并去除结缔组织和脂肪组织后,剪成 1mm3大小的组织碎片,200目钢网过滤,悬于 30m lRPMI1640培养基。将 TDLN细胞分为 3组进行培养,TDLN-Ⅰ组培养基中添加 IL-2,TDLN-Ⅱ组添加 IL-2+IL-4+粒 -单核细胞集落刺激因子 (GM-CSF),TDLN-Ⅲ组添加 IL-2+IL-4+GM-CSF+自身食管癌细胞抗原 (tAg),置于 37℃,5%二氧化碳 (CO2)培养箱培养,具体方法参见文献 [1] ......