吴志平，赵晓昆，吕 晨，杨明根，肖 宁

    细胞间隙连接 (gap junction，GJ)是普遍存在于动物组织细胞间的一种通讯方式，主要由间隙连接蛋白 (connexin，Cx)所构成。细胞通过细胞间隙连接通讯 (gap junction intercellular communication，GJIC)进行细胞间信号的传递，调控细胞的新陈代谢、增殖、分化等生理过程，对机体的代谢平衡及生长发育有重要意义[1]。研究发现GJ与肿瘤的发生、发展及侵袭转移潜能密切相关，其中Cx43是一种主要的细胞间隙连接蛋白，在多种癌细胞中都有Cx43表达的下降，是研究的热点[2]。本研究通过半定量RT-PCR的方法检测Bcl-2 mRNA，BaxmRNA及Cx43mRNA在膀胱移行细胞癌 (BTCC)组织中的表达，探讨Cx43基因与凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白表达的相关性及其生物学意义。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料 收集2007年6月—2008年6月中南大学湘雅二医院泌尿外科手术切除并经病理证实的BTCC患者新鲜组织标本35例，癌组织取肿块非坏死部分。选择同期BTCC患者距肿瘤边缘2 cm的癌旁组织21例、正常膀胱组织15例，其中良性前列腺增生手术取正常膀胱组织9例，BTCC患者手术取距肿瘤边缘>5 cm膀胱组织6例。35例BTCC患者术前均未行任何放、化疗，其中男21例，女14例;年龄38～72岁，平均 (58.6±10.2)岁;初发肿瘤23例，复发肿瘤12例;肿瘤单发21例，多发14例;肿瘤直径<3 cm 18例，≥3 cm 17例;肿瘤分期:Ta～1期24例，T2～4期11例;肿瘤分级G1级15例，G2级11例，G3级9例。

    1.2 主要试剂 Bcl-2、Bax、Cx43和人肌动蛋白 (β-actin)引物由上海生工生物工程公司合成，RT-PCR试剂盒(两步法)购自Promega公司，PCR产物回收纯化试剂盒、Taq DNA聚合酶和dNTPs试剂购自Takara公司，Trizol试剂购自Invitrogen公司。

    1.3 实验方法 所有标本 (肿瘤组织、癌旁组织，正常膀胱组织)经-196℃液氮罐取回并置于-70℃冰箱保存。

    1.3.1 引物设计 根据Bcl-2、Bax、Cx43、β-actin的mRNA序列 (genebank序列号NM_000633、NM_138764、NM_000165、NM_001101)，应用在线引物设计软件primer3设计相关引物 (见表1)。

    1.3.2 组织标本总RNA的提取与鉴定 各种标本分别取50～100 mg组织 ......