张国红，陈宋明

    缺氧诱导因子1α(HIF-1α)是机体细胞在低氧环境中产生的一种转录因子，参与低氧反应基因的调控，可促进血红素氧化酶-1(HO-1)、血管生长因子(VEGF)等因子的表达。HO-1具有抗氧化、抗炎、扩张血管作用，被认为是血管保护因子[1]。研究证实HIF诱导的HO-1对缺血-再灌注损伤具有长期的心肌保护作用[2]。本研究检测冠心病患者外周血单个核细胞HIF-1α和HO-1表达水平，探讨冠心病患者HIF-1α与HO-1表达的相关性，为诱导HO-1治疗冠心病提供依据。

    1 资料与方法

    1.1 临床资料 选择本院2006年4月—2007年12月因冠心病心绞痛或急性心肌梗死入院并在入院后行冠状动脉造影检查确诊为冠心病的患者为研究对象，共95例，其中急性心肌梗死患者35例(AMI组)，其余患者按入院前心绞痛的发作特点分为稳定型心绞痛组(SAP组，劳累性心绞痛发作的性质在1～3个月内无改变)，30例;不稳定型心绞痛组(UAP组，包括除稳定型心绞痛以外的其他类型心绞痛)，30例。选择经冠脉造影证实冠脉正常的30例患者作为对照组。所有研究对象检查前4周无感染、创伤史。同时记录患者的高血压、糖尿病、高血脂及吸烟史。

    1.2 方法

    1.2.1 外周血单个核细胞的分离 取研究对象外周抗凝血10 m l，用Hank'S液稀释1倍后加于10 ml单个核细胞分离液上(天津中科院生物医学工程研究所)，2 000r/min速度离心20 min，吸取单个核细胞层(主要为淋巴细胞)，用Hank'S液冲洗3次(1 200 r/min)，沉淀物用冻存液-80℃保存，以备行Western blot检测。

    1.2.2 Western blot印迹 应用单细胞裂解液裂解单个核细胞，离心后取上清液，利用PCA法测定蛋白含量，以每孔50μg蛋白量用缓冲液缓冲后煮沸5 min，蛋白变性后用微量加液器以每孔50μl加样，稳压60 V在12%聚丙烯酰胺凝胶电泳4 h，再进行蛋白质的电转移(转移槽60 V转膜3 h)。转膜后丽春红染色5 min，5%脱脂奶粉4℃封闭过夜。将膜泡于含HO-1一抗和HIF-1α的新鲜配制的5%脱脂奶粉溶液中(HO-1一抗为多克隆兔抗HO-1，美国ALEXIS公司出品 ......