肖 维，彭 健，张阳德

    大肠癌包括结肠癌和直肠癌，为临床常见的恶性肿瘤，而且其发病率呈上升趋势[1]。大肠癌血液微转移肿瘤的早期发现与大肠癌的预后密切相关[2]，但是目前仍然缺乏高度特异性和灵敏性的早期诊断的实验室检查指标[3]。本研究通过反转录聚合酶链式扩增 (RT-PCR)法检测大肠癌患者外周血液中癌胚抗原 (CEA)mRNA和livin mRNA的表达情况，探讨二者对早期发现大肠癌血液微转移肿瘤的意义，指导临床对大肠癌的诊疗，对其预后做出客观的判断。

    1 资料与方法

    1.1 临床资料 选取2009年2月—2010年3月就诊于中南大学湘雅医院肝胆肠外科的初发、初治大肠癌患者60例为研究对象，均经肠镜或手术病理检查证实;同时选取同时期30例大肠良性疾病 (息肉、腺瘤、肠炎、憩室等)患者为大肠良性疾病组和30例健康体检正常者为对照组。大肠癌组男32例，女28例;年龄30～76岁，平均年龄 (56±3)岁;结肠癌25例，直肠癌35例;低中分化36例，高分化24例;Dukes A+B期31例，Dukes C+D期29例;有局部淋巴结转移11例，无局部淋巴结转移49例;有远处转移13例，无远处转移47例。大肠良性疾病组男17例，女13例;年龄22～73岁，平均年龄 (51±6)岁;息肉14例，腺瘤9例，肠炎5例，憩室2例。对照组男18例，女12例，年龄27～69岁，平均年龄 (49±7)岁。3组在性别及年龄方面具有均衡性。

    1.2 主要试剂及仪器 Trizol试剂 (GIBCO公司)，PCR引物、RT-PCR试剂盒由大连宝生生物公司合成和生产，电泳仪为北京六一公司产品，紫外分光光度仪、PCR仪为美国Thermo产品，凝胶成像系统为美国Bio-RAD公司产品。

    1.3 方法

    1.3.1 CEA、livin和内参GAPDH引物设计及合成 根据genebank提供的基因信息，利用引物设计软件Primer 5.0自行设计引物，交由大连宝生生物公司合成，序列如表1所示。

    表1 PCR引物序列及扩增长度Table 1 PCR primer sequences and amplification length

    1.3.2 总RNA提取 患者入院第2天抽取肘静脉血5 ml，采血管肝素钠抗凝 ......