王彦永，马 琳，马晓伟，马芹颖，顾 平，王铭维

    经颅磁刺激 (transcranial magnetic stimulation，TMS)技术为国内外研究的热点，TMS可在脑深部产生感应生物电流，从而影响相应脑神经元电活动和局部功能的一种无创的物理治疗方法。临床研究发现帕金森病 (Parkinson's disease，PD)患者经TMS治疗后其动作反应时间及运动灵活性均有显著改善[1]，统一帕金森病评分量表 (UPDRS)评定症状有明显的好转[2-3]。动物实验表明，TMS可促进脑缺血大鼠神经元增殖[4]。本研究观察了磁刺激作用后原代培养的神经元的突起及形态改变，初步探讨磁刺激影响神经元生长发育的可能机制，为临床上应用经颅磁刺激治疗神经系统疾病提供理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 试剂和动物 B27添加剂、DMEM/F12(1∶1)、neurobasal培养液和DMEM为Gibco公司产品。胎牛血清为杭州四季青公司产品。碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)、Hoechst33258、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)、抗微管相关蛋白-2(microtubule associated protein 2，MAP-2)抗体和FITC标记的抗小鼠IgG抗体购于Sigma公司。成年和新生SD大鼠均购自河北医科大学实验动物中心。

    1.2 海马神经元原代混合培养 取昆明新生小鼠，浸泡在750 ml/L乙醇中消毒后，放在一次性无菌滤纸上，剪下鼠脑，剥出完整的脑组织，放在预冷的解剖液中分离海马。将所取组织剪碎后用1.25 g/L胰酶，37℃消化10～15 min，用含10 ml/L胎牛血清的DMEM培养液终止消化。用火焰抛光的玻璃吸管反复吹打后静置，待组织块沉淀后吸取上清，反复5次后将收集的上清液以800 r/min离心5 min，弃上清后加入含100 ml/L胎牛血清的DMEM培养液制成单细胞悬液，接种到预先用多聚赖氨酸包被的35 mm小培养皿中。将细胞培养在含50 ml/L CO2的37℃恒温培养箱中。过夜后，将培养液更换为含20 ml/L B27的neurobasal无血清培养液，3 d后换液，培养6 d的细胞用于实验。

    1.3 实验分组 实验分为4组:(1)正常组 (Contorl，C):在37℃CO2孵育箱中正常培养。 (2)假刺激组 (Shame，S):暴露于磁场环境，但不接受磁刺激。(3)40%最大刺激强度组 (40%of maximum intensity of stimulation，M1):利用40%的磁场最大刺激强度 (约0.76 T)作用于细胞 ......