王晓桃，林文远，陈蓓莉，刘健，唐爱林，莫东华

    α-干扰素 (interferon-α，IFN-α)能够抑制肿瘤细胞的生长，增加自然杀伤 (NK)细胞及其他免疫活性细胞的功能，具有广谱的抗肿瘤活性，目前已被广泛应用于血液系统肿瘤的治疗。Toll样受体 (Toll-like receptors，TLRs)是一类介导天然免疫反应并桥接或触发适应性免疫的模式识别受体(pattern recognition receptor，PRR)，TLRs可分布于各种肿瘤细胞，如结肠癌、乳腺癌、前列腺癌细胞[1]。如TLR1-9在U937细胞表达，且TLR8激动剂ssRNA40/LyoVec能明显抑制U937细胞的生长[2]。人类TLR8天然或合成的配体能逆转急性髓系白血病 (acute myelogenous leukemia，AML)患者Treg细胞的免疫抑制作用，进而增强抗瘤免疫功能[3]。这些研究提示TLR8配体可能在AML患者的免疫治疗中具有重要作用。而作为TLRs主要外源性配体的内毒素脂多糖 (lipopolysaccharide，LPS)，需与其受体TLR4结合后通过信号转导的级联反应方能产生效应。因此，IFN-α+LPS能否协同阻滞白血病细胞的增殖及其机制需要进一步研究。本研究旨在探讨LPS在体外能否增强IFN-α抑制U937细胞增殖、促进细胞凋亡、阻滞细胞周期的作用及可能机制。为IFN-α协同TLR激动剂或TLR配体佐剂免疫治疗白血病提供理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 细胞 人AML细胞株U937(上海细胞所)自外室购进后复苏后使用。

    1.2 主要试剂与仪器 24孔、96孔培养板 (美国Corning公司);RPMI-Medium1640干粉、胎牛血清 (FBS)(天津血液病研究所);四甲基偶氮唑蓝 (MTT)、二甲亚砜 (DMSO)溶液 (北京SABC公司产品);AnnexinV/碘化丙锭 (PI)试剂盒 (德国 Bender公司);Trizol试剂 (Invitroge公司产品);Western blotting化学发光试剂盒 (美国SantaCruz公司)，βactin Maker(Fermantas公司)，β-actin小鼠抗人单抗，CyclinA2、CyclinD1兔抗人单抗 (SantaCruz公司);山羊抗小鼠IgG、山羊抗兔IgG、兔抗山羊IgG(美国SantaCruz公司)。荧光抗体 (美国SantaCruz公司)。自动酶标读数仪 (国产DG-3022);Fluor ChemTM8900凝胶成像系统 (美国Alpha Innotech公司);流式细胞仪 (美国BD公司) ......