胡志娟，贾晓梅，史亚男，郭 岚，董春霞，刘 冰，牛 凯

    近年来Toll样受体 (toll like receptor，TLR)在肾脏疾病发病机制中的作用日益受到关注[1]。其中TLR4是由内毒素所编码的Ⅰ型跨膜受体，主要在内皮细胞、上皮细胞、巨噬细胞及中性粒细胞上表达[2]。在进行性肾脏纤维化过程中，由于基质增加，使巨噬细胞上TLR4的内源性配体暴露增多，如热休克蛋白60、纤维蛋白原、硫酸类肝素、纤维连接蛋白的EDA、透明质酸等。内源性配体能够激活TLR4，活化的TLR4及相关配体诱导核因子κB激活，启动白介素-1、白介素-6、白介素 -8、白介素 -12、肿瘤坏死因子 -α及 CD80与CD86等基因的转录，介导各种病原体的识别和免疫活化过程，从而导致肾脏损伤[1]。本研究采用大鼠单侧输尿管梗阻 (unilateral ureteral obstruction，UUO)诱导的肾间质纤维化 (RIF)模型，观察该模型TLR4的表达，探讨TLR4在RIF过程的作用，以及药物对UUO大鼠肾功能的影响和作用机制，为RIF的防治提供理论基础。

    1 材料与方法

    1.1 动物模型的建立与分组 健康雄性SD大鼠24只 (由河北医科大学动物室提供)，体质量150～180 g，随机分成4组，各6只:(1)正常对照组; (2)假手术组; (3)手术组;(4)尿毒清组。手术组和尿毒清组大鼠用硫喷妥钠50 mg/kg腹腔注射麻醉后，仰卧位固定，大鼠腹部正中偏左纵切口2 cm打开腹腔，暴露左肾，钝性分离左输尿管，于靠近肾盂段处行左输尿管结扎后缝合腹腔;假手术组打开大鼠腹腔后仅分离左输尿管，不结扎。模型建立后第2天起，每日8:00尿毒清组用尿毒清颗粒 (广州康臣生产)50 mg/kg灌胃 (溶于注射用水);其余组给予等量注射用水灌胃。术后14 d处死大鼠。

    1.2 观察指标及检测方法 大鼠处死时以3%水合氯醛腹腔注射麻醉各组大鼠，心脏取血标本约3 ml。血肌酐 (SCr)、尿素氮 (BUN)的测定在Beckman全自动生化分析仪上完成。黄嘌呤氧化酶法测定左肾组织的总超氧化物歧化酶 (TSOD)活力、硫代巴比妥酸 (TBA)法测定左肾组织的丙二醛(MDA)水平。试剂盒为上海朗顿生产。

    1.3 转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)的反转录聚合酶链反应 (RT-PCR)分析 均采用TRIzol(Invitrogen公司)试剂一步抽提总RNA，再反转录成cDNA(反转录酶AMV-RT购自美国Promega公司) ......