罗洪强，林茂芳，谢万灼，傅佳萍，封蔚莹，汤秋霞

    特发性血小板减少性紫癜 (ITP)是一种自身免疫性疾病，目前认为其发病与机体的免疫功能紊乱有关，近年来国内外研究提示B淋巴细胞亚群失衡以及细胞凋亡的失常与自身免疫相关性疾病的关系密切[1-2]。本研究观察了 ITP患者外周血液中B1细胞以及药物治疗后对它们的影响，以便进一步阐明该病的发病机制并对预后做出评估，更有效地运用免疫调节手段进行分层治疗。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料 选择2007年1月—2010年10月在我院住院治疗的94例ITP患者，诊断符合张之南主编的《血液病诊断及疗效标准》第3版[3]，排除其他免疫性疾病。其中男29例，女65例;平均年龄47.5岁 (17～64岁)。94例ITP患者中57例为初治 ITP患者 (初治 ITP组)，其中39例对甲泼尼龙治疗有效，18例对甲泼尼龙治疗无效;37例为难治性ITP患者 (难治性ITP组)。病程6个月～5年，患者均接受过正规肾上腺糖皮质激素治疗6周以上[4]，治疗后患者的血小板 (PLT)计数 <30×109/L，其中7例曾应用长春新碱或环磷酰胺治疗，6例曾用丙种球蛋白治疗，5例行脾切除术。治疗前皮肤均有不同程度的出血点或瘀斑，月经过多8例，牙龈渗血6例，鼻出血4例，PLT(9～24) ×109/L。选择同期在我院进行健康体检正常者20例为对照组，男8例，女12例;平均年龄44.2岁 (21～65岁)。

    1.2 观察指标 外周血CD+19细胞、B1细胞、血小板相关免疫球蛋白 (PAIgG)、PLT计数。

    1.3 检测方法 (1)试剂单克隆抗体CD5-FITC、CD19-PE及阴性对照试剂鼠抗人IgG1-PE均购自法国Immunotech公司。流式细胞仪型号EPICS-XL，为美国Beckman-Coulter公司产品。检测过程:采用直接免疫荧光法检测，抽取外周血1.5 ml(抽血后3 h内完成检测)，将EDTA抗凝全血100 μl和 CD5-FITC、CD19-PE单克隆抗体20 μl置于测定管，而在对照管中加入CD19-PE和鼠抗人IgG1各20 μl作为阴性对照，室温避光孵育15 min，溶血后上机测定，数据收集后计算出CD+19细胞 (总B淋巴细胞)及B1细胞(CD5+CD+19细胞)百分率。 (2)PAIgG检测:用流式细胞仪检测PAIgG，其中血小板相关抗体 (鼠抗人IgG)一抗，羊抗鼠IgG(H+L)二抗FITC2F(ab)2以及阴性对照试剂IgG1(mouse) -PE均购自法国Immunotech公司 ......