王亚珍，吕品田，王凤红，王辰英，焦俊芳，郑振茹

    赤芍总苷抑制人黑色素瘤A375细胞株增殖作用的研究

    王亚珍，吕品田，王凤红，王辰英，焦俊芳，郑振茹

    目的 观察赤芍总苷 (TPG)对人黑色素瘤A375细胞增殖的影响及其作用机制。方法 黑色素瘤A375细胞，分别加入12.5、25、50、100、200 mg/L TPG，对照组加等量0.9%氯化钠注射液，孵育48 h。采用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)方法测定细胞生长抑制率，用RT-PCR、Western blot法分别检测增殖细胞核抗原 (PCNA)、P21、P27、P53 mRNA及其蛋白的表达水平。结果 不同浓度 (12.5、25、50、100、200 mg/L)TPG刺激后，对黑色素瘤细胞均具有明显的增殖抑制作用。100 mg/L TPG作用黑色素瘤细胞48 h，PCNA mRNA及其蛋白表达水平较对照组显著下降，而P21、P27、P53的mRNA及其蛋白表达水平较对照组显著上升，差异有统计学意义 (P<0.01)。结论 TPG抑制黑色素瘤A375细胞增殖，与下调PCNA表达及上调P21、P27、P53表达有关。

    赤芍总苷;人黑色素瘤细胞;细胞增殖;增殖细胞核抗原

    赤芍是重要的活血化瘀中药，常以复方组成成分作用于肿瘤和血瘀症的治疗。赤芍总苷 (total paeonyglucosides，TPG)为中药赤芍的提取物。目前，仅有少数研究报道TPG对肿瘤细胞的生长有抑制增殖、促进凋亡的作用[1]，但具体机制尚未阐明。本研究以恶性黑色素瘤细胞作为研究对象，观察TPG对细胞增殖活性和增殖细胞核抗原 (PCNA)、P21、P27、P53 mRNA及蛋白表达水平的影响，为开发新的抗肿瘤药物及临床应用提供理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料 黑色素瘤A375细胞株购自中国科学院上海细胞研究所，RPMI1640培养基、胎牛血清 (美国 Gibco公司)、MTT(美国Sigma公司)，RT-PCR试剂盒 (大连宝生物工程有限公司)，PCNA、P21、P27、P53一抗 (美国Santa Cruz公司)，引物由上海生工生物技术公司合成，赤芍总苷由河北医科大学药学院惠赠。

    1.2 方法

    1.2.1 MTT法检测细胞增殖活性 黑色素瘤A375细胞以含10%胎牛血清的RPMI1640常规培养，将对数生长期的细胞接种于96孔板，饥饿24 h使细胞同步于G0期。分别以不同浓度 (12.5、25、50、100、200 mg/L)TPG 刺激 48 h ......