邓永花，赖前成，万居易，伍长学，王 波，廖 斌

    乌司他丁是一种广谱酶抑制剂，能够抑制炎性递质释放及对缺血再灌注器官具有保护作用[1]。体外循环是目前心脏外科心内直视手术不可避免的复杂的病理生理过程，复杂的管道系统、体外循环转机时间、灌注流量和压力、灌流模式等多种因素可导致患者术后发生肾功能损伤[2]。目前较少直接观察乌司他丁对体外循环缺血再灌注血清对人肾小管细胞损伤作用的保护。为此，本研究初步观察了体外循环后血清直接对人近曲肾小管上皮细胞HK-2损伤的作用，旨在探讨乌司他丁对肾功能保护作用及机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂 人HK-2引自ATCC(American Type Culture Collection);DMEM(GIBCO);胰酶 (OXODI);胎牛血清 (成都哈里公司);Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒(北京中杉金桥公司);SP9000免疫组化染色试剂盒 (北京中杉金桥公司);多聚赖氨酸，DAB显色试剂盒 (武汉博士德公司);乌司他丁 (广东天普生化医药股份有限公司生产);其余试剂均为市售分析纯。

    1.2 方法

    1.2.1 HK-2细胞株的复苏、培养、传代 从液氮罐中取出冻存的HK-2细胞投入37℃的温水中，摇动使其尽快解冻。吸出细胞悬液并滴加10倍体积的含10%胎牛血清的DMEM培养基，混匀，1 000 r/min离心5 min，弃上清液后再重复洗涤1次。用含10%胎牛血清的DMEM培养液将细胞悬液稀释混匀，接种于100 ml培养瓶中，37℃下5%二氧化碳 (CO2)细胞培养箱中静置12 h，换液除去未贴壁细胞后至细胞长满成片80%以上。用质量分数为0.25%的胰蛋白酶消化，传代。

    1.2.2 正常人、体外循环再灌注血清的制备 随机采集6例健康志愿者的外周血5 ml ......