姚舒洋，樊 英，徐兵河

    三阴性乳腺癌 (triple-negative breast cancer，TNBC)即雌激素受体 (ER)、孕激素受体 (PR)和人表皮生长因子受体2(HER2)均表达为阴性，约占新诊断乳腺癌的15%。这类疾病具有相似的特征、极高的同源性，组织分化差，多属于基底样乳腺癌，与乳腺癌1号基因 (BRCA1)相关性乳腺癌具有较多相似性[1-2]。TNBC患者发病年龄早，易早期局部复发和远处转移，增殖指数高[3-4]，无病生存时间和总生存时间均较短，预后不佳，目前国内外仍缺乏针对该特殊类型乳腺癌的规范化治疗指南。虽然TNBC缺乏内分泌治疗和抗HER2治疗的靶点，然而其他分子靶向药物正在进行体内外治疗研究[5]。目前单药索拉非尼对TNBC细胞体外抑制作用的研究不多，且尚无分子靶向药物联合顺铂 (DDP)体外治疗TNBC的报道。因而本研究观察DDP联合索拉非尼对TNBC细胞的抑制作用，探索治疗TNBC的新思路。

    1 材料与方法

    1.1 材料 选用人乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MDAMB-468、CAL-51于本实验室保存。培养传代在含10%新生牛血清的DMEM培养基中，选择指数生长期细胞进行实验。索拉非尼 (德国拜耳公司)溶解于二甲基亚砜 (DMSO)制成浓度为10 mM的溶液，分装保存于-20℃冰箱备用，加药时用DMEM培养基稀释至目标浓度，使终溶液中的DMSO浓度<0.5%。DDP购自山东齐鲁制药厂，DMEM购自GIBCO公司，MTT购自 Sigma公司，Anti-ERK1/2、Anti-p-ERK1/2、Anti-β-Actin、Anti-JNK、Anti-p-JNK购自Santa Cruz Biotechnology公司，Anti-Rabbit及Anti-Mouse购自Promega公司。

    1.2 实验分组 实验细胞分为空白对照组、索拉非尼单药组、DDP单药组、DDP联合索拉非尼组。检测细胞增殖抑制率时DDP单药剂量分别为5、10、50、100 M，索拉非尼单药剂量分别为1、2、5、10 M，DDP联合索拉非尼组药物剂量是4+2、8+4、10+5、12+6、14+7 M。检测MAPK通路关键蛋白时，各组中索拉非尼剂量均为5 M，DDP剂量均为10 M。

    1.3 MTT法检测细胞生长抑制率 MDA-MB-231、MDAMB-468、CAL-51细胞接种在96孔培养板中，每孔接种5 000细胞，设3个平行孔。培养24 h后加入药物。加入不同剂量的DDP，或 (和)索拉非尼继续培养48 h ......