段林建，张 清，王农荣，杨 斌，何士勤，孙 坚

    甲型流感具有突然暴发、迅速扩散、季节性流行等特点，严重威胁全球人类健康。中草药为祖国传统医学的宝藏，用于治疗甲型流感越来越普遍。连翘 (Forsythia suspensa)为木犀科植物，味苦、无毒、性微寒，具有清热解毒、消肿散结之功效，常用于治疗风热感冒[1]。连翘为双黄连、银翘散等40余种药物的重要成分，具有明确的体外抗流感病毒作用[2]。本研究结合中医理论及现代分子生物学技术，通过甲型流感病毒核蛋白 (nucleoprotein，NP)基因的转染，观察连翘苷对NP基因转染后表达的影响。

    1 材料与方法

    1.1 主要材料 真核质粒pcDNA3.1(+)/NP由本室制备;引物根据 (GenBank/NCB，GI:8486129)毒株的NP基因全长序列设计如下 NP-R1467:CGGGTTCGTTGCCTTTTCGTC、NP-1033:TGGATGGCATGCCACTCTGC;连翘苷 (南京泽朗医药科技有限公司，纯度98%);Hela细胞株由南昌大学医学院微生物教研室馈赠;DMEM基础培养基、Opti-MEM培养基 (USA，Gibco);胎牛血清 (USA，Hyclone);感受态细菌DH5α由本室制备及保存;质粒抽提纯化试剂盒 (USA，Genomed);甲型流感病毒NP(胶体金法)检测试剂盒 (北京，阿斯可来);LipofectamineTM2000、RNA抽提试剂盒、第一链cDNA合成试剂盒、反转录聚合酶链反应 (RT-PCR)试剂盒(USA，invitrogen)等。

    1.2 仪器 二氧化碳 (CO2)培养箱 (USA，Shellab);超低温冰箱 (JAPAN，SANYO);Ⅱ级生物安全柜 (北京，东联哈尔);洁净工作台 (上海，博讯);恒温恒湿振荡器 (太仓 ......