马洪波，黄 涛，韩 风，陈伟瑜

    我国约有90%的肝癌患者具有乙型肝炎背景，部分患者存在丙型肝炎病毒 (HCV)、乙型肝炎病毒 (HBV)以及丁型肝炎病毒 (HDV)的重叠感染，其在经过长期的慢性炎症后可逐渐演变为肝硬化等。现代分子生物学研究发现，转化生长因子β1-抑癌基因 (TGF-β1-Smad)信号通路在肝纤维化、肝炎、肝硬化过程中扮演着重要角色，是目前分子生物学研究的热点之一[1]。Smad4蛋白由DPC4基因编码，是一类对TGF-β1信号起转导作用的胞质信号级联效应分子，具有受体激活型效应的Smad(R-Smad)受到信号刺激后会发生磷酸化，导致蛋白自身的构象发生变化并与同型的Smad4蛋白相互结合而形成寡聚体，寡聚体转位入核之后则参与调控很多靶基因的表达，发挥TGF-β1-Smad信号通路的调控效应;而抑制型的Smad(I-Smad)也必须和Smad4蛋白进行相互作用后才可抑制TGF-β1信号向下一级传递[2-3]。DPC4基因所编码的蛋白即Smad4蛋白对整个TGF-β1-Smad信号转导途径起关键作用，该基因的表达异常会引发细胞无限增殖的现象，研究TGF-β1与Smad4蛋白在肝癌组织中的表达具有重要意义。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料 选取2008年3月—2011年4月我院收治的肝癌患者54例，其中男31例，女23例，年龄24～67岁，平均44.9岁。肿瘤分期:Ⅰ期14例，无显著肝癌症状和体征;Ⅲ期19例，有腹腔积液、黄疸、远处转移、恶液质症状之一;Ⅱ期21例，症状介于Ⅰ期与Ⅲ期之间。患者的肝癌组织均在术后冷冻保存备用;同时选取患者的癌旁组织分别编号冷冻后备用。

    1.2 方法

    1.2.1 试剂与仪器 浓缩型兔抗人TGF-β1和Smad4蛋白单克隆抗体均购自Sigema公司，工作浓度为1∶200。原位杂交检测试剂盒、二氨基联苯胺 (DAB)试剂盒、链霉亲和素-过氧化复合物 (ABC)等购自罗氏公司。

    1.2.2 实验方案 采用原位杂交显色法 (IHCABC法)，TGF-β1以及Smad4一抗工作浓度均为1∶200 ......