李 里，宫 亮，吴玉斌

    1 材料与方法

    1.1 材料 2011年5—12月选取清洁级Wistar大鼠48只，雄性，体质量120～150 g，4～6周龄，均购自中国医科大学附属盛京医院实验动物中心。

    1.2 方法

    1.2.1 分组 48只大鼠采用随机数字表法分为两组，假手术组 (sham组)和模型组 (UUO组)各24只，每组术后3、7、14 d分为3组，每组8只。

    1.2.2 动物模型的制备 以10%的水合氯醛 (0.3 ml/kg)腹腔注射麻醉，于左侧耻骨上切口，沿左肾下极寻找到左输尿管，UUO组在输尿管上用4号丝线上下结扎两处，从中剪断输尿管，分层缝合后关闭腹腔;Sham组分离输尿管不结扎，随即缝合腹腔，完成手术。

    1.2.3 标本的采集和处理

    1.2.3.1 尿 术后3、7、14 d收集24 h内的新鲜尿样，以离心半径8 cm，3 000 r/min，离心15 min，除去沉渣，放置在-80℃的冰箱内，检测β2微球蛋白水平。

    1.2.3.2 血术后3、7、14 d大鼠腹主动脉采血4 ml，离心半径8 cm，3 000 r/min，离心10 min，后置于-80℃冰箱保存，检测血肌酐水平。

    从图谱中可以看出，我国武术文化研究的作者合作知识图谱呈现集中—分散的状态。每一个节点代表一个发文作者，节点大小代表作者发文数量的多寡，线条数量和粗细代表了作者之间的合作关系及强度。作者的科研能力与发文数量和载文期刊质量成正比，科研团队合作不仅能够促进知识、资源共享，更有助于提高科研产出与学术影响力。

    1.2.3.3 肾组织 术后3、7、14 d处死大鼠。留取左侧肾组织，以无菌0.9%氯化钠溶液冲洗，滤纸吸干表面水分，一部分置4%多聚甲醛中固定，制成冷冻切片，待做病理形态学检测和免疫组化。余下分离肾脏皮质和髓质，至-80℃冰箱，待做蛋白印迹 (Western blot)。

    1.3 观察指标及检测方法

    1.3.1 肾功能检测 全自动生化分析仪 (中国医科大学附属盛京医院检验科)检测尿β2微球蛋白和血肌酐水平。

    1.3.2 肾组织形态学检测 苏木素-伊红 (HE)染色，观察肾小管间质损伤的程度。

    1.3.3 免疫组织化学染色 (SABC)法检测肾皮质PCNA、caspase-3的表达 实验步骤按照说明书进行。PCNA抗体购自北京生物技术公司。caspase-3(1∶40)为兔抗人多克隆抗体 (美国Zymed公司)，SABC试剂盒 (武汉博士德生物公司) ......