胡晓松，唐 瑜，李 娟，刘馨莲，孙 静

    临床上许多疾病均可导致脑缺血的发生，随着对脑缺血疾病研究的逐渐深入，脑缺血耐受 (brain ischemic tolerance，BIT)现象越来越受到人们的关注。目前认为给予1次或多次短暂、轻微 (亚致死量)的缺血缺氧刺激即脑缺血预处理(CIP)，可作为一种损伤性应激原刺激而有效调动机体自身的内源性保护机制，从而诱导BIT的发生，增加机体对下一次严重损伤的抵抗能力，但其作用机制目前仍不明了[1-2]。

    Toll样受体 (Toll-like receptors，TLRs)是一个介导天然固有免疫的古老家族，在感染性炎症中扮演着重要角色。近来研究发现TLR4介导的信号通路，在非病原性炎症中亦占有重要地位。本实验通过研究TLR4及其靶基因蛋白核蛋白印迹法因子-κB(NF-κB)在CIP后脑缺血梗死区周围的表达变化，旨在探讨该信号通路在BIT诱导机制中的可能作用。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物及分组 健康7～8周的SD雄性大鼠，清洁级，体质量250～300 g，共45只。采用随机数字表法将大鼠分为3组，CIP组:给予CIP 20 min，3 d后给予大脑中动脉阻塞(MCAO)2 h，再灌注6 h、24 h、72 h;MCAO组:未行CIP，单纯暴露动脉处的解剖结构20 min(假手术)，余同CIP组;Sham组:两次均为假手术，均暴露解剖结构，未进行缺血处理。每组各时间点5只。

    1.2 动物模型的制备 参照并改良局灶-局灶性脑缺血预处理模型[3]制备方法，大鼠术前12 h禁食不禁水，以4%水合氯醛腹腔内注射麻醉 (7.5 ml/kg)，置仰卧位，于颈部行长约25.0 mm常规纵行切口。暴露并钝性游离右侧颈总动脉(CCA)、颈内动脉 (ICA)及颈外动脉 (ECA)，结扎ECA远侧端，动脉夹夹闭CCA近心端，在结扎线近端距分叉5.0 mm处剪一约0.2 mm小口。取浸于2.5×106U/L肝素钠的长6.0 cm、直径0.26 mm、头端圆钝的尼龙线从ECA残端插入，经CCA分叉部进入ICA(19.0±0.5)mm，直至感觉有阻力时，结扎ECA近心端。20 min后轻轻抽出栓线约10 mm形成第1次再灌注，固定尼龙线并全层缝合切口。3 d后再次麻醉大鼠，找到ECA结扎处，重新剪口插线阻断大脑中动脉(MCA)，结扎ECA，并留置长约4.0 cm的尼龙线于体外，缝合皮肤。2 h后抽出栓线，形成第2次再灌注。

    1.3 神经病学评分及MCAO模型成功的判断标准 参照Longa等[4]神经病学评分标准:0分:无神经功能缺损症状;1分:轻度局灶性神经功能缺损 (不能完全伸展右前肢);2分:中度神经功能缺损 (向右侧转圈);3分:重度神经功能缺损(向右侧倾倒);4分:不能自发行走 ......