朱慧明，魏 刚，张会欣，何奇龙，高学东，齐晓琳，王宏涛

    糖尿病性视网膜病变 (DR)是糖尿病微血管病变中最重要的表现，同时也是糖尿病并发症在眼部的主要表现[1]。研究表明，高糖状态下生长因子在眼内新生血管形成过程中起关键性作用，并且能够引起视网膜微血管渗透性的改变，造成视网膜屏障的破坏，同时能够诱导血管生成素生成增加，造成视力损坏。芪黄明目胶囊在DR临床研究中取得了很好的疗效[2]，但其机制尚不明确。故本研究以自发性2型糖尿病KK/Upj-Ay小鼠为模型，观察芪黄明目胶囊对DR小鼠视网膜生长因子表达的影响，探讨其机制，为临床用药提供参考。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物 KK/Upj-Ay小鼠 (自发性2型糖尿病小鼠，用专用饲料喂养3个月即可造模成DR小鼠)36只，体质量30～40 g;C57BL/6小鼠9只，体质量25～30 g。均为SPF级，雄性，12周龄，购于北京华阜康生物科技股份有限公司，动物合格证号:0225144。饲养于SPF级动物屏障系统。

    1.1.2 试剂与仪器 芪黄明目胶囊，由石家庄以岭药业股份有限公司提供;血管内皮生长因子 (VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)、色素上皮衍生因子 (PEDF)、转化生长因子-β(TGF-β)、胰岛素样生长因子-Ⅰ (IGF-Ⅰ)引物由上海生工生物技术公司合成;VEGF、bFGF、PEDF、TGF-β、IGF-Ⅰ一抗购自Santa Cruz公司。荧光定量 PCR仪，ABI公司产品;凝胶成像分析仪，Biorad公司产品。

    1.2 方法

    1.2.1 动物分组与给药 36只KK/Upj-Ay小鼠按空腹血糖(FBG)水平随机分为模型组、芪黄明目胶囊高剂量组 (8.32 g生药/kg)、芪黄明目胶囊中剂量组 (4.16 g生药/kg)、芪黄明目胶囊低剂量组 (2.08 g生药/kg)，另设C57BL/6小鼠为对照组，每组9只。采用灌胃给药，芪黄明目胶囊各组按照相应的剂量给予芪黄明目胶囊，对照组和模型组给予等体积的蒸馏水，1次/d，连续3个月。

    1.2.2 小鼠视网膜消化铺片标本制备 连续给药3个月后，把小鼠麻醉，取眼球，固定于10%甲醛液中48 h，分离视网膜，自来水漂洗，放入3%胰蛋白酶消化液37℃孵箱中消化振荡约3 h，仅剩下一层透明的视网膜血管网，进行HE-PAS染色。

    1.2.3 Real Time PCR(qPCR)方法测定 VEGF、bFGF、PEDF、TGF-β、IGF-Ⅰ mRNA的表达 取视网膜组织 ......