杜颖华，叶存喜，马景学，韩 瑶，张 斌，包永琴，郝玉华

    增殖性玻璃体视网膜病变(PVR)是一种严重的致盲性眼病，有较高的复发率，治疗效果一直不理想[1]。视网膜色素上皮细胞(RPE)是PVR发生过程中最重要的细胞[2-3]。姜黄素是近年来国内外关注的一种天然药物，可以抗肿瘤、抗纤维化、抗炎、抗菌、抗氧化等，且毒性低[4-15]。细胞内传导中，胞内游离钙离子(Ca2+)作为重要的第二信使参与信息传递，其浓度的变化调节着细胞的代谢、基因表达。而整合素家族是介导细胞与细胞外基质以及细胞间黏附的重要黏附分子家族，它们能诱导细胞的活化、增生、运动和凋亡，在生物体的发育、器官形成、血管新生、炎症反应和创伤愈合等过程中发挥重要作用。安建斌等[16]用不同浓度的姜黄素处理传代培养的兔RPE，结果显示姜黄素可明显抑制其上皮细胞增殖。姜黄素是否可以抑制人RPE的增殖，对细胞内传导信号和细胞外基质有何影响，国内外少有报道。为此我科在体外培养人RPE细胞，姜黄素干预后，利用MTT筛选合适的浓度，激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察早期细胞内钙离子的荧光强度，实时定量PCR检测整合素的相应变化，探讨相关性。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂与仪器 Ham′s F12培养液(英国Biochrom公司)；胎牛血清(FBS)、小鼠抗人角蛋白AE1/AE3、小鼠抗人S-100抗体(武汉博士徳生物工程有限公司)；L-谷氨酰胺、胰蛋白酶(上海实生生物技术有限公司)；NaCl溶液(上海国药集团化学试剂有限公司)；0.0625 g/L青霉素、100 g/L链霉素(石家庄华北制药有限公司)；CO2细胞培养箱(日本SANYO公司)；培养皿(美国Corning公司)；二甲基亚砜(DMSO)、四氮唑化合物(MTT)(美国Sigma公司)；倒置相差显微镜(日本Nikon公司)；激光共聚焦显微镜(德国Zeiss公司)；Trizol(美国Invitrogen公司)；Realplex2荧光定量PCR仪(德国Eppendorf公司)；姜黄素(美国ALEXIS公司，纯度≥98.5%)；羊抗小鼠的IgG(美国 Cell Signal Technology公司)。

    1.2 细胞培养 原代人RPE细胞购自武汉原生原代公司，捐献者无已知的眼部疾病。人RPE细胞的传代培养参照以前的文献[17]。培养液采用Dulbecco改良的Ham′s F12培养基，含10%的胎牛血清，4 mM谷氨酸，100 U/ml青霉素和100 mg/ml链霉素；当细胞贴壁增殖后，在37 ℃，采用含有0.125%胰蛋白酶的乙二胺四乙酸(EDTA)的混合溶液消化5 min ......