曹天泽，高维实，郭慧军，马虎林，施晓辉

    树突细胞(DC)是体内最高效能的抗原提呈细胞,在抗肿瘤免疫中处于核心地位[1]。Kjaergaard 等[2]进行的动物模型研究显示,将DC与各种肿瘤抗原相结合构建DC肿瘤疫苗,可有效抑制肿瘤生长。有研究将进展期肾癌患者自体肾癌细胞裂解，将获得的肿瘤抗原制备DC疫苗，使患者免疫状态显著改善[3-4]。张莉等[5]利用细胞因子大量扩增从宫颈癌患者外周血中获得的DC，其表面高表达CD86、CD1a、CD83、HLA-DR等表面分子，此DC能将肿瘤抗原有效提呈给T淋巴细胞，从而在体内外诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对肿瘤细胞的特异性杀伤作用。随着DC培养技术的发展，DC疫苗已经开始进入临床。应用何种方式抗原修饰DC产生良好的抑瘤作用是目前研究的一大热点。本研究分别采用纯化培养的乳腺癌细胞、乳腺癌组织及乳腺癌细胞株SKBR-3所制备的冻融抗原分别负载自体外周血来源的DC，比较3种疫苗的抗原活性，为DC疫苗的临床制备及其应用提供相关的实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料 纯化培养的乳腺癌细胞(A组)、乳腺癌组织(B组)取自我院肿瘤外科乳腺癌手术患者，均经病理核实。乳腺癌细胞株SKBR-3(C组)购自北京协和医科大学。

    1.2 主要试剂 重组人粒细胞-巨细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、重组人白介素4(rhIL-4)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)(PEPRO TECH公司)，藻红蛋白(PE)标记小鼠抗人CD80和CD83荧光单克隆抗体、异硫氰酸(FITC)标记小鼠抗人CD86和HLA-DR荧光单克隆抗体(BD公司)。

    1.3 方法

    1.3.1 纯化培养乳腺癌细胞 无菌条件下获取新鲜肿瘤组织，将“癌巢”部分锐性粉碎，并将获得的肿瘤组织分成等质量的两份(以电子天平称取精确到0.001 g)，一份置于液氮罐中保存备用。另一份以预热的胶原酶V进行消化，经洗涤、计数后接种，以选择性培养基培养，贴壁后去上清及杂细胞 ......