张 媚，张临洪

    糖尿病周围神经病变是糖尿病最常见的并发症之一，其机制尚不明确[1-2]。雪旺细胞是周围神经髓鞘细胞，可以分泌多种神经营养因子，有维持神经元存活、促进轴突生长的作用，其在糖尿病周围神经病变发生发展中的作用已经得到广泛关注[3]。糖基化终产物 (advanced glycation end products，AGEs)是长期的高血糖状态经非酶糖化和脂质氧化等一系列反应和结构重排所形成的非酶类物质[4]，与AGEs特异性受体 (receptor of advanced glycation end product，RAGE)结合后，激活并诱发一系列促炎、促凝血反应，参与到糖尿病的神经、视网膜、血管、肾脏等多种并发症发生发展中[5]。在人类糖尿病患者和实验糖尿病动物的外周神经中都检测到了AGEs的存在[6]。然而AGEs对于雪旺细胞的功能究竟有何影响，AGEs是否通过影响雪旺细胞的功能参与糖尿病周围神经病变，目前并不清楚。本研究初步探讨AGEs对于原代培养的雪旺细胞的增殖迁移等功能的影响及机制，以期为糖尿病周围神经病变提供新的潜在治疗靶点。

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂

    1.1.1 实验动物 预备新生3 d的雄性SD乳鼠，由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。

    1.1.2 主要试剂 2%胶原酶、0.25%胰酶、DMEM培养基和胎牛血清 (FBS)购于GIBCO公司;凋亡检测试剂盒购于BD公司;核因子κB(NF-κB)活性检测试剂盒购于PIERCE公司;肿瘤坏死因子α(TNF-α)检测盒、白介素6(IL-6)检测试剂盒购于Peprotech公司;荧光定量聚合酶链式反应(PCR)逆转录试剂盒和PCR试剂盒购于Takara公司;兔抗鼠Caspase-3抗体和羊抗兔二抗购于Cell Signaling Technology公司。

    1.2 方法

    1.2.1 原代分离纯化雪旺细胞 乳鼠脱颈椎处死，75%乙醇消毒，暴露坐骨神经，剥离其外膜，将神经纤维剪成1 mm的小段，置于2%胶原酶和0.25%胰酶等量混合液中消化20 min，然后弃去消化酶，反复吹打洗涤，用含20%FBS的DMEM培养液重悬细胞，接种于培养板中，每3 d换1次液，观察细胞生长情况。采用免疫细胞化学染色法行雪旺细胞标志蛋白S100染色鉴定。

    1.2.2 制备AGEs 牛血清清蛋白 (BSA)终浓度5.0 g/L，葡萄糖终浓度50 mmol/L，充分溶于磷酸盐缓冲液 (PBS)中，过滤除菌，37℃避光孵育3个月 ......