罗庆伟，田小林，蒋志庆，林 静

    在世界范围内，胃癌发病率位居所有恶性肿瘤的第2位。淋巴结转移是导致胃癌治疗失败和死亡的主要原因，是胃癌最重要的预后影响因素。约60%的可切除胃癌在确诊时已经发生了淋巴结转移，进展期胃癌总的5年生存率不足20%，但目前的研究对于胃癌淋巴结转移的分子机制知之甚少。淋巴结转移是胃癌的最主要转移方式及导致术后复发的原因之一[1]，影响着胃癌患者的预后。肿瘤淋巴结转移与淋巴管生成关系密切，淋巴结转移率即转移淋巴结数与检出淋巴结数的比值，与患者预后有相关性，淋巴结转移率升高提示患者预后较差[2]。podoplanin是一种小分子黏液样跨膜糖蛋白，主要表达于淋巴管内皮细胞，为淋巴管特异性标志物，可用以区分微淋巴管和微血管。本研究采用免疫组化方法检测患者胃癌组织、癌旁组织及胃正常组织淋巴管podoplanin表达情况，探讨podoplanin在胃癌淋巴结转移中的作用。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料 选取桂林医学院附属医院病理科2009年1月—2010年2月收治的胃癌患者54例，均有完整的病历资料且经病理学检查确诊;收集其手术切除的胃癌组织、癌旁组织存档蜡块及同期10例健康体检者的正常胃组织蜡块作为实验材料。胃癌组织蜡块须包含癌中央区 (癌内)及胃癌组织与周围正常组织交界区 (癌周)，且患者术前未接受过化疗。54例胃癌患者中男36例，女18例;年龄30～90岁，平均55.7岁;低分化腺癌18例，中分化腺癌24例，高分化腺癌12例;有淋巴结转移30例，无淋巴结转移24例;2003年国际抗癌联盟 (UICC)胃癌TNM分级:Ⅰ级13例，Ⅱ级18例，Ⅲ级14例，Ⅳ级9例。

    1.2 仪器与试剂 Shandon切片机 (型号:Finesse325)，隔水式电热恒温培养箱 (型号:PHY-DHS-600-B)，OLYMPUS正置荧光显微镜 (型号:BX51)，OLYMPUS光学显微镜(型号:CH30)，Thermo Electron Finnpipette转移器 (型号:Z46607)，抗podoplanin单克隆抗体 (购自Santa Cruz Biotechnology公司)，免疫组化PV-9000试剂盒和二氨基联苯胺(DAB)试剂盒 (购自北京中杉金桥生物技术有限公司)。

    1.3 免疫组化染色 (1)采用辣根过氧化酶标记的SP法，实验材料经10%甲醛固定后，常规制作石蜡包埋块并切片，切片厚度为4～6 μm，常规脱蜡至水，枸橼酸盐高温高压法抗原修复;(2)3%的H2O2室温孵育10 min ......