徐明昊，张 悦，孙明华，李恩泽，朱志图

    肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL)能特异地诱导肿瘤细胞凋亡，既往研究认为肠癌细胞对TRAIL不敏感[1];近年研究发现，PI3K/Akt通路的活化可能与肠癌细胞的敏感性有关[2-3]。奥沙利铂 (L-OHP)是第三代铂类化疗药物，目前已广泛应用于消化道肿瘤的治疗，尤其是结肠癌的一线治疗。本研究通过亚毒性剂量奥沙利铂抑制PI3K/Akt通路以增强TRAIL诱导结肠癌RKO细胞凋亡的敏感性，探讨其作用机制，为结肠癌的治疗提供新思路。

    1 材料与方法

    1.1 材料 人结肠癌RKO细胞株由中国医科大学惠赠;重组人TRAIL购于美国Cytolab/Peprotech Asia公司;奥沙利铂购自江苏恒瑞医药股份有限公司。碘化丙啶 (PI)、甲基偶氮唑蓝(MTT)、RPMI 1640培养基、RNAse购于Sigma公司;胎牛血清购于中国医学科学院血液学研究所;兔抗人p-Akt、兔抗人Akt、兔抗人Caspase-3及鼠抗人actin抗体购自Santa Cruz公司;羊抗兔和羊抗鼠辣根过氧化物酶标记的二抗购于北京中杉金桥生物技术有限公司。

    1.2 细胞培养 人结肠癌RKO细胞株常规传代培养，生长于含10%灭活胎牛血清、青霉素 (100 U/ml)及链霉素 (100 mg/ml)的RPMI 1640培养基，于37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱内培养。

    1.3 细胞增殖率 采用MTT法进行检测，取对数生长期的细胞，0.25%胰酶消化，制成单细胞悬液，调整密度为3×104/ml，接种于96孔培养板中。空白对照组加入RPMI 1640培养基，每孔终体积为200 μl。对照组加入RPMI 1640培养基继续培养24、48、72 h，终止培养前4 h每孔加入 MTT液20 μl，到预定时间后加入二甲基亚砜 (DMSO)液200 μl;TRAIL单药组加入25、50、100、200、400 ng/ml的TRAIL继续培养24 h;奥沙利铂单药组加入10、20、40、80 μg/ml奥沙利铂继续培养24、48、72 h;联合用药组加入100 ng/ml TRAIL和40 μg/ml奥沙利铂继续培养24 h;各组培养完成后振荡，采用酶联免疫检测仪测定570 nm处各孔吸光度值，各组实验重复3次取平均值。计算细胞增殖率和药物抑制细胞增殖50%的浓度 (IC50)。细胞增殖率 (%)=(处理组平均吸光度值-空白对照组平均吸光度值)/(对照组平均吸光度值-空白对照组平均吸光度值)×100% ......