关欣亮，田小丽，谢进生

    马凡综合征(MFS)是15号染色体的原纤维蛋白-1基因(FBN1)缺陷导致的常染色体显性遗传性全身结缔组织病变，最早是由法国儿科医生Marfan在100多年前提出[1]。MFS患者临床表现各异，发病率为1/5 000～1/10 000，主要累及骨骼、心血管、眼睛等系统，约25%的患者是自发突变，缺乏家族史[2-3]。FBN1定位于15q21.1，包括65个外显子，长度约为235 kb，编码一种分子量为230 kDa的糖蛋白——原纤维蛋白-1，而原纤维蛋白-1是细胞外基质微纤维的重要组成部分，因此FBN1突变影响了微纤维的结构与功能[4-8]。至今已发现超过800余种的FBN1突变。FBN1由3种富含半胱氨酸的结构域组成：(1)47个表皮生长因子样结构域(EGF结构域)，其中43个EGF结构域含有钙结合共有序列，可与钙离子结合称为钙结合表皮生长因子样结构(cbEGF结构域)；(2)潜在的转化生长因子β1结合蛋白结构域(LTBP结构域)；(3)杂交分子结构域(hybrid motif结构域)[1，3-4，8-11]。近来由于分子生物学和遗传学领域的进展，分析FBN1突变对早期诊断、遗传咨询及对MFS及其类似疾病的认识具有极为重要的意义。由于MFS是一种进展性心血管疾病，一部分患儿随年龄增大症状才逐渐明显，临床表现个体差异很大，早期症状不典型，且缺乏特异性，加之大部分患儿无家族史，因此MFS患儿的诊断存在一定的特殊性。而我国对FBN1与MFS的研究还处于落后阶段，尤其对MFS患儿的早期诊断经验不足。单链构象多态性(SSCP)分析是目前应用最广泛的检测基因突变的方法之一。为此，本研究应用聚合酶链式反应(PCR)-SSCP和DNA测序技术对MFS患儿进行FBN1突变筛查。

    1 资料与方法

    1.1临床资料选择我院2010年1月—2011年12月心外科病房收治的MFS患儿8例，年龄均<18岁，符合1996年MFS的Ghent诊断标准[6]。

    1.2方法

    1.2.1DNA提取抽取2 ml外周静脉血，置EDTA抗凝管，用全血基因组DNA抽提试剂盒(QIAGEN 公司)提取DNA。

    1.2.2PCRFBN1的65个外显子的PCR扩增引物分别设计在外显子两侧的内含子区域。FBN1的PCR扩增引物由北京大学分子医学研究所的田小利教授惠赠。其中，FBN1的第21号外显子的PCR扩增引物：上游引物：5′-ATATTATTCCCTCCTCTGCAG-3′，下游引物：5′-GTGGTATAGGAACCACAG-3′ ......