吴广飞，张运捷，刘博伟，陆 强，尹福在，陈莉明

    糖尿病肾病(DN)是糖尿病(DM)最常见的微血管并发症之一，其发病机制还不很清楚。正常T细胞表达和分泌的活性调节蛋白(RANTES)属于趋化因子家族，RANTES在体内分布广泛，肾脏系膜细胞及肾小管上皮细胞等均可产生RANTES,趋化单核-巨噬细胞、T细胞炎症和免疫反应，参与肾小球硬化和肾间质纤维化。RANTES基因启动子存在-403G/A突变，已证实基因突变提高了基因表达水平[1]，其与DN的相关研究国内外报道较少。本研究对中国天津地区汉族人群中RANTES基因启动子-403G/A变异进行基因分型，探讨其与2型糖尿病(T2DM)并发DN风险的关系。

    1 对象与方法

    1.1研究对象选取2004年6—10月天津医科大学代谢病医院住院的T2DM患者 244例为研究对象，其中男118例，女126例；年龄36～82岁，平均(62.3±9.9)岁；体质指数(BMI)(24.5±3.2)kg/m2。T2DM诊断依据1999年世界卫生组织(WHO)DM诊断标准。DM诊断病程均在8年以上，血浆肌酐水平200 μg/min为临床清蛋白尿组(DN2组)。

    1.2方法

    1.2.1病史询问及体格检查由专人对受试者进行详细病史询问并填表，空腹测量身高、体质量、收缩压(SBP)及舒张压(DBP),并计算BMI，记录血总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、纤维蛋白原(FIB)及糖化血红蛋白(HbA1c)水平。

    1.2.2受试者基因组DNA提取应用蛋白酶K快速裂解消化法提取基因组DNA，经紫外分光光度法测定OD值，计算DNA浓度。

    1.2.3RANTES基因启动子-403G/A多态性测定RANTES基因启动子-403G/A上游引物为5′-CACAAGAGGACTCATTCCAACTCA-3′；下游引物为5′-GTTCCTGCTTATTCATTACAGATCgTA-3′(g引入酶切消化位点)，由Takara公司合成(PAGE纯化，纯度>99%)。限制性核酸内切酶(RsaⅠ)购自美国Promega公司，由北京鼎国生物技术有限责任公司代理,RsaⅠ识别序列：5′…GT▼AC…3′、3′…CA▼TG…5′，聚合酶链反应(PCR)体外扩增目的基因片断，反应体系25 μl，反应参数如下：94 ℃预变性5 min，然后94 ℃变性30 s、59 ℃退火30 s、72 ℃延伸1 min进行45个循环。1.5%的琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物 ......