杨治芳，吴 芳，汤佳珍，刘建英

    桥本甲状腺炎(HT)又称慢性淋巴细胞性甲状腺炎，是最常见的自身免疫性甲状腺疾病之一，自身免疫损伤是本病导致甲状腺功能减退(甲减)的主要机制。调节性T细胞(Treg)在阻止自身免疫反应、维持免疫耐受中发挥着重要作用[1]，FOXP3是维持Treg发育和功能的关键转录因子[2]。本研究通过观察不同甲状腺功能状况HT患者外周血Treg的表达，旨在探讨HT的免疫学机制。

    1 对象与方法

    1.1研究对象选择2010年10月—2012年10月我院内分泌科门诊及住院部、甲状腺外科住院部HT患者46例为病例组，年龄25～60岁，平均(40.9±11.2)岁；诊断标准：血清甲状腺过氧化物酶抗体(TPO-Ab)和(或)甲状腺球蛋白抗体(TGAb)水平明显升高，甲状腺外科手术后病理或细针穿刺涂片表现为淋巴细胞浸润；根据患者甲状腺激素水平分为甲状腺功能正常组16例，亚临床甲减组14例，临床甲减组16例。选取同期在我院体检的与病例组患者年龄、性别相匹配的健康人20例为对照组，年龄26～54岁，平均(39.4±7.5)岁。所有入选者无类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、多发性硬化症等自身免疫性疾病，近3个月内未服用过激素类药物、免疫抑制剂等。

    1.2主要试剂和仪器鼠抗人异硫氰酸荧光素(FITC)-CD4、别藻青蛋白(APC)-CD25、藻红蛋白(PE)-FOXP3及同型对照单克隆荧光抗体、细胞固定剂与打孔剂均购自美国eBioscience公司；FACS Calibur流式细胞仪为BD公司生产。CD4+T细胞磁珠分离试剂盒购自Dynal公司。磁分离架为Dynal公司生产。Trizol购自Invitrogen公司，逆转录试剂盒购自Promega公司。荧光定量聚合酶链反应(PCR)仪为Bio-Rad公司生产。Sybe green定量PCR试剂盒购自Toyobo公司。

    1.3方法

    1.3.1外周血单个核细胞(PBMC)分离与收集获得所有入选者知情同意及医院伦理委员会批准后 ......