刘 亮，郑晓梅，杨福兵，王 斌，包长顺，陈礼刚

    ADAMDEC1具有金属内肽酶、整联蛋白结合的活性，参与蛋白水解，负调控细胞附着，破坏肿瘤细胞侵袭的组织学屏障，在肿瘤侵袭、转移中起关键作用[1-2]。已有研究显示，ADAMDEC1在颅咽管瘤组织中可过度表达，并在肿瘤的发生和发展过程中发挥着重要而复杂的作用。因此，从肿瘤细胞表达ADAMDEC1基因的角度来研究人颅咽管瘤细胞生长增殖的机制，对认识肿瘤发生、发展的机制以及基因治疗等具有十分重要的意义。

    1 材料与方法

    1.1 材料 颅咽管瘤细胞，由我室自行经原代培养获得[3]。Trizol提取液购自美国Rothe公司，Western bloting试剂购自Amersco公司，RT-PCR试剂盒购自大连宝生物技术发展中心，DNA Marker DL2000购自宝生物工程有限(大连)公司，即用型SABC试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司，DAB显色试剂盒购自美国DAKO公司，鼠抗人ADAMDEC1单克隆抗体购自美国Santa公司，DNA Marker购自北京新长江生物科技有限公司，重组人生长激素(rhGH)购自长春金赛药业有限责任公司。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养 将处于对数生长期的颅咽管瘤细胞3×103/ml培养24 h，实验组分别加入浓度为10 ng/ml、100 ng/ml、1 000 ng/ml的rhGH，对照组加入不含rhGH的等体积的培养液，再继续培养24 h后，进行后续实验。

    1.2.2 RT-PCR检测颅咽管瘤细胞ADAMDEC1 mRNA的表达 用RNAiso Plus试剂盒提取实验组与对照组颅咽管瘤细胞的总RNA，操作按试剂盒说明书进行。琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性，紫外分光光度计测定浓度和纯度，计算样品的总RNA浓度。利用Primer 5自行设计引物，交由上海英俊公司合成，采用人稳定表达的基因β-actin作参照，序列如下，ADAMDEC1上游引物：5′-CATCTTCGGTTGCTGTTATT-3′，下游引物：5′-CACTCTGTGGTATGGTTTGG-3′；扩增产物长度：424 bp，退火温度：58.2 ℃ ......