渠红霞，袁彩君，王 越

    在世界范围内，大肠癌在癌症的病死率中排第4位，每年有100多万的大肠癌新发病例[1]，国内的发病率也呈上升趋势。大肠癌的治疗主要依靠手术，晚期治疗主要以化疗为主，但是疗效不甚理想，为了寻求新的治疗方法，全世界的研究学者把目光投向了溶瘤型腺病毒。溶瘤型腺病毒又称选择复制性腺病毒，其能够在肿瘤细胞中选择性复制，但不能在正常细胞中复制，因具有可复制、体积小、弥散能力强等优点，近年来成为肿瘤生物治疗的热点[2-3]。

    目前研究较多的溶瘤型腺病毒是Barker和Berk研发的E1B缺失腺病毒ONYX-015。ONYX-015又称dl1520,是敲除了编码55 kDa蛋白的E1B区2496-3323核苷，且在E1B区的2022位点上C改变为T，使得dl1520感染的宿主细胞无法编码55 kDa蛋白[4]。因其具有众多优点已进入临床Ⅲ期试验[5]，同时已有研究表明，dl1520在与化疗药物联合应用时还可增加其疗效。与dl1520相似，ZD55同样是编码E1B 55 kDa核酸缺失型溶瘤型腺病毒，但是ZD55可携带外源抗肿瘤基因，ZD55的优点使得其被多数学者应用于溶瘤型腺病毒携带外源抗肿瘤基因的分子治疗。但是腺病毒的安全性部分是基于在人类正常细胞中复制缺陷的特性,而目前应用的溶瘤型腺病毒来自野生腺病毒,有一定回复突变的危险性[6]。因此鉴于腺病毒的特性，dl1520在治疗肿瘤时可能存在安全隐患。

    盐酸吉西他滨(Gem)化学名为2′-脱氧-2′，2′-二氟胞苷盐酸盐(β-异构体)，是美国礼来公司研发的核苷类抗代谢抗肿瘤药物。有报道指出Gem与腺病毒联合应用时能获得良好的肿瘤细胞杀伤效果，且对病毒在细胞内复制有一定的抑制作用[7-8]。本研究以体外培养大肠癌细胞系HCT-116及人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为研究模型，单独或联合应用Gem和E1B缺失溶瘤型腺病毒，观察其对肿瘤细胞的杀伤作用及安全性。

    1 材料与方法

    1.1实验材料dl1520、ZD55和重组腺病毒(Ad-GFP)购自上海信裕生物科技有限公司，HCT-116和HUVEC购自中科院上海细胞生物学研究所，MTT购自Biosharp公司，McCOY′s5A培养基购自GIBCO公司，高糖DMEM培养基、青链霉素(PS)及胎牛血清购于天津永大化学试剂有限公司，Gem购于江苏豪森药业股份有限公司，5氟尿嘧啶(5-Fu)购于南通海尔斯医药有限公司。

    1.2方法

    1.2.1细胞培养及药品制备细胞均采用贴壁培养法，HCT-116在McCOY′s5A培养基中培养；HUVEC在高糖DMEM培养基中培养 ......