张峻岭,柳君如，徐士福,程 琳，马秀亮

    白癜风为一种自身免疫相关性皮肤病已成共识，研究发现白癜风患者皮损内杀伤性T淋巴细胞浸润可以直接破坏黑素细胞，近年发现，免疫系统失调与基因的差异表达密切相关。国外学者Yu等[1]应用基因芯片技术发现白癜风皮损区CLEC2B mRNA表达高于非皮损区。笔者应用实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法，发现白癜风患者皮损区CLEC2B基因较正常人表达增加,并发现CLEC2B基因过表达的淋巴细胞培养上清液对黑素细胞的增殖和黑素合成有一定的抑制作用[2],同时发现CLEC2B基因过表达可上调与白癜风密切相关的细胞因子可溶性白介素2受体(sIL-2R)mRNA的表达。为进一步阐明CLEC2B基因在白癜风发病中的作用，在此基础上本研究利用RNA干扰技术，使 CLEC2B基因沉默，观察CLEC2B基因沉默后淋巴细胞sIL-2R mRNA的变化，旨在探索该基因功能相关细胞因子及其参与的信号传导途径，从而推测该基因参与白癜风发病的免疫学机制。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂与材料 DMRIE-C脂质体及OPTI MEM购于美国Invitrogen公司，CLEC2B引物序列由不列颠哥伦比亚大学Youwen zhou教授惠赠，CLEC2B siRNA由上海吉玛制药技术有限公司设计合成，RPMI 1640液态培养基购于美国Gibco公司,DMEM高糖液态培养基、TBD胎牛血清购于天津灏洋生物科技有限公司，TRIzol、TRANScript cDNA第一链合成试剂盒、SuperReal PreMix(SYBR Green I)均购于天根生化科技(北京)有限公司，MTT细胞增殖及细胞毒性检验试剂盒购于南京凯基生物科技有限公司，DMSO购于美国Sigma公司，人Jurkat淋巴瘤细胞株来自中国科学院血液病研究所。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养 细胞培养条件均为37 ℃，5%二氧化碳(CO2)进行培养，Jurkat淋巴瘤细胞用RPMI 1640培养基 ......