张再兴

    喉癌是我国北方地区最常见的头颈部恶性肿瘤之一，近几年其发病率呈上升趋势，但目前其发病机制还不十分清楚。ARHI基因是母源性印迹肿瘤抑制基因[1]，该基因定位于1p31，分子量为26 000，结构上与Ras家族具有高度同源性，属于小分子G蛋白的一种。研究表明，尽管ARHI基因属于Ras超家族成员之一，但其与大部分Ras家族成员都是癌基因不同，ARHI基因具有抑癌作用[2-3]。目前，关于ARHI基因与喉鳞癌的关系研究鲜见报道，本研究旨在探讨ARHI蛋白在喉鳞癌组织中的表达及其临床意义。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料 选择1996年11月—2012年10月在我院接受手术治疗并经两位以上病理专家确诊的喉鳞癌患者60例，其中男38例，女22例；年龄28～76岁，平均61.2岁；排除术前接受放疗及化疗的患者。

    1.2 方法 手术切除癌组织后10 min内取材，取材时避免取到明显的坏死区域，同时选取其中30例患者的癌旁组织作为对照，癌旁组织为距癌组织至少0.5 cm处远端正常喉组织。采用免疫组化法(SP法)检测ARHI蛋白的表达，试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

    将切取的组织标本常规石蜡包埋、切片后于60 ℃烤箱干烤4 h，常规脱蜡至水，3%过氧化氢溶液浸泡10 min灭活内源性过氧化物酶，然后加入10 mmol/L浓度pH 6.0枸橼酸钠缓冲液于100 ℃煮沸10 min，进行抗原修复；室温自然冷却30 min后加入正常马血清，室温下封闭20 min，加入一抗小鼠抗人ARHI单克隆抗体(Santa Cruz Biotechnology)，按1∶100稀释，4 ℃过夜，磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤3次后加入生物素化二抗，室温30 min，PBS洗涤3次后加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素，室温下封闭30 min ......