胡旭昌，王栓科，康学文，张海鸿，汪 静，万 麟，安丽萍，刘文忠，马靖琳，王翠芳

    骨肉瘤是最常见的人类恶性肿瘤，尽管应用化疗、放疗、手术治疗骨肉瘤在过去几十年取得了很大的进步，但并未显著提高本病的治愈率，尤其是多学科综合治疗后肺转移的问题，15%～25%的患者需重新化疗和切除转移灶[1-2]。吉西他滨具有广谱抗肿瘤活性[3]，对多种肿瘤细胞在体外表现出明显的细胞毒作用[4-5]。本研究通过观察吉西他滨对人骨肉瘤MG-63细胞株在体外的抗肿瘤作用，探讨其在抑制肿瘤细胞增殖及抑制人骨肉瘤细胞系肿瘤转移相关基因1(MTA1)mRNA表达的作用，为有效治疗骨肉瘤提供新的思路。

    1 材料与方法

    1.1材料

    1.1.1细胞来源人骨肉瘤细胞株MG-63购于中国科学院细胞库。

    1.1.2主要试剂吉西他滨(哈尔滨誉衡药业股份有限公司)，胎牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)，DMEM/F12(武汉博士德生物工程有限公司)，青霉素、链霉素(哈尔滨制药集团有限公司)，二甲亚砜(DMSO)、四甲基偶氮唑盐(MTT，Sigma公司)，胰蛋白酶(Amresco公司)，Annexin V-FITC/PI双染法细胞凋亡检测试剂盒(南京凯基生物科技发展有限公司)，RNA提取试剂盒(Invitrogen公司)，反转录聚合酶链反应(RT-PCR)试剂盒、实时定量试剂盒(Takara公司)。

    PCR引物由宝生物工程(大连)有限公司合成。人β-actin引物序列：上游引物5′-TGGCACCCAGCACAATGAA-3′，下游引物5′-CTAAGTCATAGTCCGCCTAGAAGCA-3′；人MTA1序列：上游引物5′-CGGCATCCATGCTGCTCTTA-3′，下游引物5′-ACTGGTCGATCTGCTTGTCTGTG-3′。

    1.1.3主要仪器二氧化碳(CO2)细胞培养箱、台式低温高速离心机(Heraeus公司) ......