周 颖，张 辉，赵 敏，谢永红

    缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α)是氧调节亚基，又是功能亚基，在缺氧条件下HIF-1α具有促进血管形成及影响肿瘤细胞增殖的功能[1]。环氧化酶2(cyclooxygenase-2，COX-2)是一种诱导型酶，与肿瘤细胞的增殖、抗细胞凋亡、肿瘤血管的生成有关[2]。人乳头状瘤病毒(human papillomavirus，HPV)是一种DNA病毒，感染人和动物的皮肤或黏膜可引起增殖性损伤。近年来，越来越多的国内外临床和实验室研究检测出肺癌患者携带HPV[3-4]，尤其是HPV 16、18型。但HPV感染与肺癌的关系，目前说法不一。有关肺癌中HIF-1α和COX-2与HPV感染的关系报道较少。本研究探讨HIF-1α和COX-2在非小细胞肺癌(NSCLC)发生、发展中的作用以及HPV感染与NSCLC的相关性，并初步分析HIF-1α和COX-2与HPV感染的关系。

    1 资料与方法

    1.1 临床资料 收集秦皇岛市第一医院2012年1—5月NSCLC新鲜癌组织标本60例为NSCLC组，其中男46例，女14例；年龄36～80岁，平均55岁；鳞癌42例，腺癌18例；高分化12例，中分化29例，低分化19例；淋巴结转移30例，无淋巴结转移30例；TNM分期：Ⅰ期28例，Ⅱ期26例，Ⅲ期6例；吸烟者43例，不吸烟者17例。另选取同期住院的肺良性病变组织20例为肺良性病变组，其中男13例，女7例；年龄28～80岁，平均42岁；肺结核6例，炎性假瘤5例，硬化性血管瘤4例，肺大疱4例，支气管扩张1例。标本取材后，置-20 ℃保存，甲醛水溶液固定，石蜡包埋。

    1.2 HPV聚合酶链式反应(PCR)检测

    1.2.1 引物 选用分别用来扩增HPV 16、18型的特异性引物2对，均由北京奥科生物技术有限责任公司合成。引物序列见表1。

    1.2.2 组织DNA的提取 取适量冷存组织，加提取缓冲液制成单细胞悬液后，沸水浴10 min，冷却至室温加蛋白酶K消化，酚-氯仿-异戊醇反复抽提3次，再经100%冰冷无水乙醇沉淀、70%冰冷无水乙醇洗涤后，加TE(10 mmol/L Tris-HCl ......