王亚媛，高 薇，王 燕，冯 欣

    类风湿关节炎 (rheumatoid arthritis，RA)是一种慢性炎症性疾病，以滑膜增生和外周关节对称性、侵蚀性关节炎为主要特征，是一种慢性系统性自身免疫性疾病。RA早期主要表现为关节的红肿热痛以及功能障碍，最终可能会导致关节的畸形甚至患者的残疾。它不仅患病率高，而且致残率亦高，是造成人群劳动力丧失的主要疾病之一。其病因与发病机制，即在RA中炎症和关节损害是如何发展和慢性持续的仍旧是未知的。但是已经有相关研究表明信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3，STAT3)在RA的发病过程中会有持续表达，造成滑膜的持续性炎症。然而目前尚无理想的治疗手段，因此进一步寻找治疗RA的有效方法是亟待解决的难题。

    本实验通过构建靶向STAT3的小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)转染进入人RA成纤维样滑膜细胞 (fibroblast-like synoviocytes，FLS)，从而观察FLS的一系列生理变化、转染的效率及其抑制率，从而为下一步实施动物造模实验提供理论依据，进一步揭示STAT3在RA发病中的作用，为未来RA的基因治疗奠定基础。

    1 材料与方法

    1.1 滑膜组织 本实验用的滑膜组织由辽宁医学院附属第一医院骨关节科提供，患者为2012年2—12月行关节镜滑膜切除的RA患者，诊断均符合1987年美国风湿病学会 (ARA)修订的RA的诊断标准。术前获得患者知情同意。

    1.2 主要试剂 DMEM高糖培养基和胎牛血清购自Hyclone公司;Ⅱ型胶原酶和胰蛋白酶均购自Sigma公司;Trizol和LipofectamineTM2000转染试剂盒均购自美国Invitrogen公司;聚合酶链反应 (PCR)引物合成由上海生工生物工程股份有限公司完成，反转录聚合酶链反应 (RT-PCR)试剂盒购自宝生物工程 (大连)有限公司;兔抗人STAT3抗体、羊抗兔抗体(二抗)均购自Santa Cruz公司;靶向STAT3的siRNA干扰质粒由上海吉凯基因化学技术有限公司设计构建，共有3个干扰靶序列，分别为 stat3-siRNA-1:5'-TGACCAACAATCCCAAGAA-3';stat3-siRNA-2:5'-ACAATCTACGAAGAATCAA-3';stat3-siRNA-3:5'-TGAAATCATCATGGGCTAT -3'。

    1.3 方法 ......