黄 健，黄韻祝，杨国珍，蹇孝丽

    血浆三酰甘油(TG)水平升高是2型糖尿病(T2DM)患者血脂代谢异常的主要特征之一[1-2]。研究表明，人类载脂蛋白A5(ApoA5)基因的单核苷酸突变(SNPs)对人群的TG水平有显著影响，其中ApoA5-1131T>C及56C>G两个位点基因多态性对血浆TG水平的影响较大[3]。由于基因多态性分布存在种族差异，因此本研究对贵州汉族健康人群及T2DM患者进行ApoA5基因多态性研究，探讨基因多态性与T2DM的相关性。

    1 资料与方法

    1.1 临床资料 选取2012年3月—2013年3月贵阳医学院附属医院收治的无亲缘关系的T2DM患者192例为T2DM组，其中男88例，女104例；平均年龄(58.2±10.3)岁，均符合世界卫生组织(WHO)1999年糖尿病诊断标准。另选择同时期我院体检中心体检血脂及血糖正常者206例为对照组，其中男82例，女124例；平均年龄(58.8±9.2)岁。排除标准：急性炎症，风湿免疫疾病，恶性肿瘤，心脑血管、肝、肾疾病，甲状腺疾病。两组均为贵州地区汉族人群，年龄、性别间有均衡性。

    1.2 研究方法

    1.2.1 血脂及血糖水平检测 采用生化管抽取受试者清晨空腹外周血5 ml，离心半径13.5 cm，3 000 r/min离心5 min,取上层血清使用奥林巴斯5400全自动生化分析仪测定TG、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)及血糖水平。

    1.2.2 外周血基因组DNA提取 抽取外周静脉血2 ml，乙二胺四乙酸二钠(EDTA)抗凝用于提取基因组DNA。按亚能生物技术有限公司DNA提取试剂盒说明书抽提基因组DNA。取5 μl基因组DNA与1 μl 6×loading buffer点样，用1%琼脂糖凝胶电泳检测，90 V电压电泳60 min。在凝胶成像仪上观察所提取的基因组DNA的亮度及纯度(此试剂盒提取的DNA在0.8%的琼脂糖凝胶上电泳有一条清晰的约20 kbp的DNA条带)。

    1.2.3 ApoA5-1131T>C、56C>G位点的限制性片段长度多态性(RFLP)分析 (1) 聚合酶链反应(PCR)扩增：引物设计参考相关文献[4]设计如下：-1131T>C位点上游5′GGAGCTTGTGAACGTGTGTATGAGT 3′,下游5′CCCCAGGAACTGGAGCGAAATT 3′。56C>G位点上游5′GGCTCTTCTTTCAGGTGGGTCTCCG 3′ ......