徐丽平，李 佳，房 林

    乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，根据美国2010年发布的数据，2009年全美女性新发乳腺癌207 090例,高居榜首，远超过第2位消化系统肿瘤125 790例，乳腺癌死亡共39 840例[1]。2003—2007年我国乳腺癌发病率41.64/10万，居女性癌症发病的第1位，死亡率 9.63/10万，居女性肿瘤死亡率的第6位[2]。因此乳腺癌已成为严重威胁全世界女性生命的疾病之一。研究表明微小RNA(microRNAs)是一组非编码RNA，通过作用于mRNA使其降解或抑制翻译，调控基因的表达，从而参与细胞的增殖、凋亡、细胞分化、肿瘤的侵袭转移以及肿瘤干细胞调控等[3-6]。微小RNA-26b(miR-26b)在肝细胞癌、肺癌、乳腺癌和膀胱癌等多种肿瘤中表达异常，其在不同肿瘤中扮演着癌基因或者抑癌基因的角色[7-11]。本研究采用荧光定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测miR-26b在乳腺癌及正常乳腺组织中表达水平，MTT法分析其对于乳腺癌MBA-MD-231细胞增殖的影响，并寻找其可能靶基因。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料 选取上海市同济大学附属第十人民医院甲乳外科2010年1月—2012年5月术后病理确诊为乳腺癌的女性患者38例，年龄35～82岁，中位年龄52岁；术前均未行化疗、放疗及内分泌治疗。取乳腺癌组织，并取距离肿瘤组织>5 cm正常乳腺组织作为对照。随访时间为行手术治疗后至2013年4月，患者术后均接受化疗，目前均无复发转移。人乳腺癌MBA-MD-231细胞株购于中国科学院。

    1.2 microRNAs提取和反转录 按照Tiangen公司miRcute microRNA提取分离试剂盒说明书进行操作。microRNAs反转录参照Chen等[12]的方法，通过特异茎环引物，按照下列顺序在PCR试管中加入反应物(体积为8.6 μl)：超纯水 2 μl，5×buffer 1.7 μl，microRNAs茎环引物(各个microRNAs及内参U6)1.9 μl，反转录酶(Primescript RT Enzyme MixI) 1 μl，microRNAs sample 2 μl。反应条件为：16 ℃ 30 min，42 ℃ 30 min，85 ℃ 8 min，4 ℃ 10 min，反应结束后置于4 ℃冰箱保存。

    1.3 实时定量RT-PCR 按照Takara公司SYBR Premix Ex Taq(Perfect Real Time) DRR041A说明书完成加样 ......