郑丽英，黄新玲，张 焱，李新梅，李 静，芦永华，谢建新

    肥胖是一种慢性营养性疾病，其本质是机体控制能量代谢平衡的机制紊乱，使体内脂肪堆积过多和/或分布异常，是遗传因素和环境因素共同作用的结果。现代生活方式的改变和过度营养导致的肥胖已成为严重的世界性健康问题，截至2008年，全球超重(BMI>28 kg/m2)人数约为15亿，其中肥胖(BMI>30 kg/m2)人数约为5亿[1]。腺苷酸激活蛋白激酶(AMP-activated protein kinase，AMPK)广泛存在于真核细胞中，是高度保守的丝氨酸/苏氨酸激酶，对机体能量代谢平衡起着中枢调节作用，AMPK一旦激活，可关闭脂肪酸、三酰甘油、胆固醇等合成代谢途径，开启糖酵解、葡萄糖摄取和脂肪酸氧化等分解代谢途径。此外，AMPK通过介导某些激素和细胞因子的释放和表达而作用下丘脑摄食中枢，调节摄食行为，引起肥胖或体质量减轻[2-4]。

    肥胖导致的炎症及炎症诱导的胰岛素抵抗是发生代谢综合征的关键，肥胖启动炎症反应的分子机制是目前国际上研究的热点。肥胖患者脂肪细胞的脂解增加，游离脂肪酸(FFA)通过脂肪细胞表面的TLR4介导，启动核转录因子κB(NF-κB)免疫炎症信号通路，NF-κB发生核转移，诱导炎性因子的表达，引发免疫炎症反应[5]。本研究以脂肪细胞为模型，探讨AMPK与 NF-κBp65的相互作用，在细胞水平研究能量代谢与免疫调节间的关系，为阐明肥胖启动炎症反应的分子机制提供实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料 成纤维细胞3T3-L1购自中国科学院上海细胞库，脂多糖(LPS)、5氨基-4-甲酰胺咪唑核糖核苷酸(AICAR)、Compound C、尼古丁、3-异丁基-1-甲基-黄嘌呤(IBMX)、地塞米松、胰岛素、油红O购自Sigma公司。高糖DMEM培养基、胎牛血清、小牛血清购自Gibco公司。Phospho-AMPKα(Thr172)、Phospho-NF-κBp65购自Cell Signaling公司，Rabbit Anti-β-actin购自北京博奥森生物技术有限公司，辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG购自北京中杉金桥生物技术有限公司。超敏化学发光检测试剂盒购自Pierce公司，肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素6(IL-6)酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒购自上海西唐生物科技有限公司，FFA检测试剂盒购自南京建成生物科技有限公司，甲醛、氯化钠(NaCl)、氯化钾(KCl)、磷酸一氢钠(Na2HPO4)、磷酸二氢钠(NaH2PO4)等化学试剂均为国产分析纯 ......