徐 丹，黄晓东，张 姮，吴 杰

    非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是慢性肝病最常见的病因之一,其发病机制目前尚未明确[1]。NAFLD与胰岛素抵抗有关，而胰岛素抵抗患者常伴有高瘦素血症。瘦素是近年来发现的调节机体内分泌和能量代谢的重要肽类激素,具有细胞因子的特性,通过与相应的瘦素受体结合发挥作用，瘦素对能量摄入和消耗起关键调节作用[2-3]。瘦素与瘦素受体结合调节多种细胞内信号通路，既往研究较多的是Janus激酶和信号传导及转录激活因子(JAK-STAT)信号通路、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路[4]，而对于磷脂酰肌醇3-激酶(PI3-K)通路的报道较少。然而,瘦素、瘦素受体、PI3-K及蛋白激酶B(PKB)在NAFLD的发病机制中所起的作用仍不清楚，本研究旨在通过检测瘦素、瘦素受体及其下游信号通路在NAFLD患者中的表达，探讨其在NAFLD发生及发展中的意义。

    1 资料与方法

    1.1 临床资料 选取2007年5—9月武汉市中心医院肝胆外科收治的术前B超诊断为脂肪肝，术中肝穿刺活组织检查证实为NAFLD 的患者30例为NAFLD组，其中男15 例，女15 例；年龄38～56岁，平均(42.0±8.4)岁。NAFLD诊断标准参见NAFLD诊疗指南(中华医学会肝脏病学分会脂肪肝和酒精性肝病学组2010年1月修订)。另选择同时期因胆囊结石(静止期)及胆囊息肉住院的肝功能正常者30例为对照组，其中男14 例，女16例；年龄39～55岁，平均(43.9±8.4)岁。两组患者性别构成和年龄分布具有均衡性。术中经皮肝穿刺活组织等检查均征得患者知情同意。

    1.2 血清瘦素水平测定 过夜禁食14 h，于清晨空腹卧位取肘静脉血8 ml，5 ml送检生化检查，3 ml离心取上清，-70 ℃冰箱保存。采用放射免疫法(RIA)，应用竞争机制原理，标准或样品中的瘦素和加入的125I-瘦素共同与一定量的特异性抗体产生竞争性免疫反应。125I-瘦素与抗体的结合量与标准或样品中瘦素的水平呈一定的函数关系。用免疫分离试剂将结合部分(B)与游离部分(F)分离后，测定结合部分的放射性强度，并计算相应结合率(B/B0)。用已知标准瘦素水平与对应结合率作图，即得标准抑制曲线。从标准抑制曲线上查出对应结合率在待测样品中的水平。

    1.3 免疫组织化学法 将肝脏组织取出后在4%多聚甲醛固定液中4 ℃固定16～18 h，脱水、透明、包埋、切片、常规脱水，3%过氧化氢孵育10 min后用蒸馏水冲洗，磷酸盐缓冲液(PBS)浸泡，再滴加封闭用正常血清工作液室温孵育10 min ......