杜美林，王小玲，樊建平，张立玮，内田智久，村上和成，王 续，刘月平，王士杰

    胃癌是常见的恶性肿瘤之一，也是主要的表观遗传疾病，近年来学者对胃癌的表观遗传学关注度极高，表观遗传学包括基因甲基化、组蛋白修饰、微小RNA调控等[1]。其中基因甲基化备受关注，很多基因的甲基化与肿瘤发生有密切关系，是肿瘤发生的重要因素，并且关系着肿瘤的进展、治疗及预后。随着分子生物学技术的不断发展，进一步研究信号传导通路在胃癌发生发展中的作用，寻求抗肿瘤药物治疗的新靶点是肿瘤研究的新热点，其中研究最多的是Wnt通路，分泌型卷曲相关蛋白(secreted frizzled-related proteins，SFRPs)在此通路中发挥了重要作用。正常情况下，SFRPs竞争性抑制Fz受体，使Wnt通路的转录激活信号封闭，从而使调控下游基因表达的β-连环蛋白处于稳定状态；当SFRPs基因发生甲基化时，导致Wnt通路激活，细胞过度增殖，从而导致肿瘤发生[2]。大量研究已表明SFRPs的高甲基化可导致肿瘤发生，尤其在消化道肿瘤中高表达[3]。

    此外，幽门螺杆菌(H.pylori)是已确认的胃癌Ⅰ类致癌原，这与H.pylori菌株不同、宿主基因易感性及环境因素有关。H.pylori本身不能导致肿瘤发生，但是其感染后的代谢产物及感染引起的炎性反应促使原癌基因相继被激活，抑癌基因丢失或功能失活，出现基因表达异常或功能发生改变，从而引起细胞增殖，导致肿瘤形成[4-5]。有研究显示，在胃癌及癌前病变中H.pylori感染可能与异常DNA甲基化相关[6]。故根除H.pylori是否能逆转基因甲基化？本研究探讨了H.pylori感染致SFRPs基因启动子甲基化的机制和相关性，以期为胃癌的治疗提供新疗法。

    1 材料与方法

    1.1 标本 随机抽取河北医科大学第四医院2012年10—11月内镜咬检不同胃黏膜病变标本72例，其中胃癌40例，异型增生17例，慢性胃炎15例；中位年龄为43岁；男女比例为3.8∶1。患者均未接受过任何治疗，除胃病以外无其他疾病，并有完整的临床病理资料及随访资料，且患者均为无亲缘关系的河北省汉族人。

    1.2 方法 每例患者均在胃组织同一部位取2块标本，1块于-20 ℃保存用于提取全基因组DNA，另1块放入10%甲醛溶液中固定，留作病理组织学检查及免疫组化检测。

    1.2.1 提取全基因组DNA 采用Ezup柱式动物基因组DNA抽提试剂盒提取标本的基因组DNA，选用亚硫酸氢钠(NaHSO3)、对苯二酚、氢氧化钠(NaOH)、蒸馏水的混合溶液进行DNA的修饰 ......