邹浩军，林莉莉，孙 达

    心脑血管缺血性疾病是临床常见疾病，具有发病率高、病死率高、致残率高等特点[1-3]，严重损害人类健康。因此，寻找有效的防治措施至关重要，如改变生活习惯、降压降脂、抗动脉粥样硬化以及相关的基因、蛋白调控，均能有效防治缺血性心脑血管疾病[4]。2008年斯坦福大学Mochly-Rosen D所领导的课题组首次发现乙醛脱氢酶2(ALDH2)对缺血心脏的保护作用，明确显示激活ALDH2能显著抑制心肌梗死面积[5]，后期又有研究显示ALDH2与缺血性脑卒中关系密切[6]。目前已知的ALDH2激动剂为化合物Adal1,故寻找能提高ALDH2活性的药物有重要意义。本课题组在研究中偶然发现质子泵抑制剂奥美拉唑(OME)能增加ALDH2活性,其是否能通过提高ALDH2活性而保护神经元呢？本研究利用原代神经元缺氧缺糖(OGD)模型，探讨OME对原代神经元凋亡的影响及可能作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 动物及试剂 清洁级SD孕鼠，购自上海斯莱克动物实验中心，动物合格证号：SCXK(沪)2007-0005；注射用OME(配溶媒)，购自阿斯利康公司；Adal1和Cya均购自Sigma公司；Neurobasal培养基、改良Eagle培养基、胎牛血清均购自GIBCO公司；活细胞计数(cell counting kit-8，CCK-8)试剂盒购自日本株式会社同仁化学研究所；Hoechst 33342荧光染色试剂盒和TUNEL试剂盒购自碧云天生物技术研究所。

    1.2 方法

    1.2.1 原代皮质神经元的培养及鉴定 取妊娠15～16 d孕鼠1只，颈椎脱臼处死，75%乙醇消毒腹部，打开腹腔，取出胎鼠。解剖显微镜下分离并剪碎脑组织，用0.25%胰蛋白酶37 ℃水浴消化10 min，磷酸盐缓冲液(PBS)终止消化反应。离心后彻底洗净胰酶，加入接种培养基，200目不锈钢滤器过滤，以2.5×105/cm密度种板。24 h后更换Neurobasal生长培养基，第5天全量换液，于第7天半量换液后用于实验。用神经元特异性烯醇化酶抗体进行免疫细胞化学染色，计数阳性神经元达95%以上，符合实验要求。

    1.2.2 实验分组 神经元增殖和凋亡实验：将培养的神经元用Rand A 1.0软件完全随机分为正常对照组(Control组)、模型组(OGD组)和OGD+OME组(分别加入3、10、30、100、300 μg/ml的OME)。ALDH2激动剂Adal1和阻滞剂Cya对OGD神经元凋亡的影响：将培养的细胞随机分为Control组、OGD组、OGD+Adal1组和OGD+Cya组 ......