冯 莉，韩 晶，左 静，吕雅蕾，王玉栋，刘 巍

    结直肠癌是目前最常见的消化道肿瘤之一，发病率及死亡率均呈上升趋势，是威胁人类健康的重要疾病。以手术为主的综合治疗是结直肠癌的主要治疗方法，化疗为重要辅助治疗，其中氟尿嘧啶(5-Fu)为结直肠癌化疗的重要药物，因此5-Fu的敏感性成为可能影响预后的重要因素，值得关注。近年来报道胸苷酸合成酶(thymidylate synthase，TS)与5-Fu敏感性存在相关性，并可能与预后相关。为此，本研究应用免疫组化方法检测93例原发性结直肠癌患者肿瘤组织TS表达情况，并应用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测肿瘤组织对5-Fu的敏感性，以探讨TS与5-Fu敏感性的关系及与临床病理特征、预后的相关性。

    1 资料与方法

    1.1 临床资料 选取河北医科大学第四医院2006年10月—2009年4月收治的病理明确的行结直肠癌根治术的Ⅰ～Ⅳ期结直肠癌患者93例(Ⅳ期结直肠癌均合并肝转移，肝脏病灶一同切除)为研究对象，其中男41例，女52例；年龄22～81岁，中位年龄 63岁；TNM分期参照2009年第七版《AJCC肿瘤分期手册》，其中Ⅰ期15例，Ⅱ期32例，Ⅲ期41例，Ⅳ期5例。排除临床合并其他恶性肿瘤或临床病理特征不完整的患者。患者术前均未行放化疗；Ⅰ期患者术后未行化疗，Ⅱ～Ⅳ期的78例患者中73例术后应用5-Fu为基础的化疗。无病生存期(DFS)定义为根治性治疗到肿瘤复发或因各种原因出现死亡的时间，肿瘤药物咨询委员会(ODAC)一致认为DFS延长代表着临床获益，故以DFS为研究终点。对所有患者进行随访，随访方式：门诊复查、电话随访。随访终点：随访截止日期2011-09-30、出现复发转移日期、因其他原因死亡日期、失访日期。

    1.2 方法

    1.2.1 免疫组化法

    1.2.1.1 主要试剂 TS兔抗人抗体、SP免疫组化试剂盒及二氨基联苯胺(DAB)显色系统(北京中杉金桥生物技术有限公司)。

    1.2.1.2 步骤 调取所有患者于我院病理科保存完整的病理蜡块，重新切片并应用SP法进行免疫组化染色。SP法：取蜡块切成4 μm厚切片，烘烤60 min；经二甲苯脱蜡至梯度乙醇脱水(室温完成)；抗原修复；3%过氧化氢(H2O2)灭活内源性过氧化物酶，0.01 mol/L磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗2 min ×3次；正常羊血清工作液封闭10 min，滴加一抗(用PBS代替一抗做阴性对照，hMLH1、hMSH2抗体稀释1∶200)，0.01 mol/L PBS冲洗2 min×3次；滴加生物素标记的二抗 ......