刘红英，杨利丽，杨和军，刘顺梅，张金宝

    近年来，随着人们对于遗传疾病危害的认识逐渐加深，产前诊断越来越受到关注。由于传统产前诊断方法对于孕妇及胎儿均存在一定的伤害，因此，无创性产前诊断成为近年来众多学者的研究热点之一[1]。母血中胎儿特异性RNA的发现为无创性产前诊断的研究开辟了新的篇章[2]。本研究通过对孕妇外周血胎儿ε血红蛋白基因mRNA的定量分析，阐述ε血红蛋白基因mRNA的浓度与孕龄之间的关系，从而为进一步临床诊断方案的选择提供理论依据。

    1 资料与方法

    1.1 临床资料 选择2008年10月—2009年11月在潍坊市人民医院行产前检查的7～16周正常单胎妊娠孕妇30例为研究对象，年龄25～37岁；第一次妊娠9例，多次妊娠21例。均无内外科疾病和吸烟史，均签署知情同意书。

    1.2 方法

    1.2.1 标本采集和处理 取孕妇空腹肘静脉血5 ml，置于乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2)抗凝的试管中，5 ml全血加入10 ml 异硫氰酸胍裂解液，快速而彻底的匀浆，并分装到1.5 ml的离心管中，每管装1 ml全血异硫氰酸胍裂解液。

    1.2.2 全血RNA的提取和检测 常规方法提取孕妇全血RNA，紫外分光光度计检测吸光度，判断RNA的浓度和纯度是否符合要求。

    1.2.3 胎儿ε血红蛋白基因mRNA表达水平检测 使用AMV逆转录试剂盒进行cDNA的合成，总反应体系20 μl，其中RNA 5 μl，5倍反应缓冲液4 μl，Rnase inhibitor(20 U/μl) 1 μl，dNTP mix(10 mmol/L) 2 μl，AMV逆转录酶(10 U/L) 2 μl，逆转录结束后产物于-70 ℃冷冻保存备用 ......