许 娜，周 旋，肖小珍，卢绮思，肖雅娟，高冠伦，周红升，徐 丹，刘晓力

    骨髓微环境不仅支持正常或恶性造血细胞的生长、增殖，还能保护肿瘤细胞逃避化疗药物引起的凋亡，其中骨髓基质细胞可分泌多种细胞黏附因子介导耐药[1]，是近几年国内外学者研究的热点。上皮钙黏着蛋白(E-cadherin，E-cad)是钙黏蛋白家族成员之一，表达于骨髓基质细胞和CD34+造血干细胞，介导造血细胞与骨髓基质细胞的相互作用，E-cad可直结合β-连环蛋白(β-catenin)形成复合物抑制Wnt/β-catenin通路激活[2]。本研究应用实时定量PCR方法检测急性髓系白血病(AML)患者骨髓细胞中E-cad和β-catenin基因表达水平，为深入研究骨髓微环境介导的耐药提供实验室基础。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料 选取2010年9月—2012年7月南方医科大学南方医院血液科诊治的初发AML患者75例(AML组)，均符合原发性AML诊断标准[2]，均知情同意。其中男41例，女34例；年龄为13～67岁，中位年龄35岁。按照FAB分型：M1 3例、M2 27例、M3 7例、M4 16例、M5 22例。其中55例完成染色体核型分析，包括正常核型31例，染色体异常24例。另选取同期我院诊治的非恶性血液病患者20例为对照组，其中缺铁性贫血13例，特发性血小板减少性紫癜7例；男12例，女8例；年龄为15～60岁，中位年龄34岁。两组患者性别构成及年龄间有均衡性。

    AML组患者诱导缓解方案：非M3患者采用DA(柔红霉素、阿糖胞苷)、IA(去甲氧柔红霉素、阿糖胞苷)、TA(吡喃阿霉素、阿糖胞苷)、HA(高三尖杉酯碱、阿糖胞苷)方案；M3患者采用全反式维甲酸诱导分化治疗。共有7例进行自体干细胞移植，3例进行异基因干细胞移植，随访370 d。

    1.2 方法

    1.2.1 RNA提取及反转录为cDNA 取肝素抗凝骨髓液3～5 ml，常规Ficoll淋巴细胞分离液分离单个核细胞，TRIzol提取细胞总RNA，经紫外分光光度计和10%琼脂糖凝胶电泳检测RNA质量和浓度。按照反转录酶试剂盒(TAKARA公司)说明书中的步骤反转录cDNA。

    1.2.2 实时定量PCR检测E-cad和β-catenin基因表达 引物由上海英骏生物技术有限公司合成，E-cad上游引物：5′-GGCTCAAGCTATCCTTCAC-3′，下游引物：5′-CTTGAGCCCAGGAGTTTGAG-3′；β-catenin上游引物：5′-ACCTTTCCCATCATCGTGAG-3′ ......