刘 伟，柴文戍

    铜绿假单胞菌是机体免疫力低下者急性院内感染的重要原因，也是肺纤维化或支气管扩张患者慢性或反复肺感染的最常见原因[1]。绿脓菌素(PCN)是铜绿假单胞菌产生的毒力因子，对哺乳类细胞有很多破坏性作用。研究证明了PCN通过产生活性氧(ROS)对内皮细胞[2]和上皮细胞[3]产生氧化损伤作用。一氧化氮(NO)是哺乳类动物宿主防御的重要成分，是独特的抗菌剂，NO抑制各种微生物的生长，包括病毒、细菌、寄生虫和真菌[4]。NO衍生的活性分子，如过氧亚硝基(ONOO-)，可以诱导病原体氧化损伤。研究证明NO在缺血再灌注损伤时能够防止氧化损伤，并减少哺乳动物宿主细胞的氧化压力[5]。S-亚硝基-N-乙酰半胱氨酸(SNAC)是NO供体，可以改善细胞氧化损伤。本实验主要探索PCN对感染鼠体内ROS、超氧化物歧化酶(SOD)、白介素8(IL-8)的作用及其机制，进一步探讨SNAC对此作用的影响。

    1 材料与方法

    1.1 材料 PCN购买于Sigma公司。实验所用动物均为无病原体的8～12周龄、体质量230～250 g的健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠(辽宁医学院动物实验中心提供)。试剂盒购自南京建成生物工程研究所，N-乙酰半胱氨酸(NAC)与亚硝酸钠(NaNO2)购买于生工生物工程(上海)股份有限公司。

    1.2 方法

    1.2.1 动物模型制备及分组 采用随机数字表法将90只健康雄性SD大鼠分为对照组、PCN组和SNAC组，每组30只。对照组和PCN组大鼠分别腹腔注射1 ml/100 g 0.9%氯化钠溶液，SNAC组大鼠腹腔注射SNAC(1 ml/100 g)。用1%戊巴比妥钠溶液(40 mg/kg)行大鼠腹腔注射麻醉，对照组气管内接种0.9%氯化钠溶液0.2 ml，PCN组和SNAC组分别气管内接种PCN 0.2 ml(6×108CFU/ml)。

    1.2.2 SNAC准备 NAC和NaNO2用于SNAC准备[6]。由等摩尔的NAC和NaNO2混合生成SNAC水溶液，室温条件下避光混合搅拌20 min。0.9%氯化钠溶液稀释SNAC到终浓度100 nmol/L并立即使用。

    1.2.3 病理标本取材及处理 分别于PCN感染后6、18、30、48、72 h，用1%戊巴比妥钠溶液(40 mg/kg)进行腹腔麻醉,处死大鼠。然后分离气管,经气管注入5 ml无菌磷酸盐缓冲液(PBS)行右侧支气管肺泡灌洗,反复5次,回收后注入无菌试管,回收率≥80%。回收的支气管肺泡灌洗液(BALF)离心(离心半径 13.5 cm,2 000 r/min ......