张磊昌，何纯钢，曹云飞，钟 武，钟世彪，龙军先，黄永红，陈利生

    结直肠癌是消化系统常见的恶性肿瘤，其发病率位居全球恶性肿瘤的第三位[1]，且其发病率从1992年以来每年以1.2%的速度升高[2]。原卫生部统计数据显示，我国结直肠癌病死率位居恶性肿瘤第五位，发病率亦呈逐年上升趋势[3]。结直肠癌的发生、发展是一个多步骤的、涉及遗传和表观遗传变化积累的复杂过程[4]。甲基化是表观遗传学多种作用机制中研究得最为广泛和深入的一种，其与基因的表达抑制和功能丧失有关[5]，在结直肠癌的发生、发展过程中发挥着重要作用[6]。既往研究表明，散发性结直肠癌组织p33ING1b启动子存在高甲基化现象[7]。p33ING1b是抑癌基因ING1编码的4种蛋白之一，近年来已成为研究热点[8]。本研究通过检测散发性结直肠癌组织p33ING1b启动子甲基化情况，分析其与患者临床病理特征及p33ING1b mRNA表达水平的关系，并进行5-氮-2-脱氧胞苷(5-aza-dC)干预实验，旨在探讨p33ING1b在散发性结直肠癌中转录抑制的可能机制，为结直肠癌的诊断和治疗提供新的靶点。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    1.1.1 标本来源 选择2008年10月—2012年3月在广西医科大学第一附属医院结直肠肛门外科住院的散发性结直肠癌患者63例，均行结直肠癌根治术并经病理检查证实，取其癌组织及相应癌旁组织切除标本。63例患者中男36例，女27例；年龄24～81岁，中位年龄58岁；结肠癌28例，直肠癌35例；Dukes分期：A/B期24例，C/D期39例；分化程度：高、中分化腺癌37例，低分化腺癌26例；26例有淋巴结转移，7例有远处转移。同时选择在我院行吻合器痔上黏膜环切术(PPH)患者13例，收集其术后痔上黏膜组织，均经结肠镜检查证实结直肠黏膜无异常。所有样本获取过程获得患者本人同意及本院伦理委员会批准。

    1.1.2 细胞株 人结直肠癌细胞株DLD-1、Caco-2均购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心。

    1.1.3 主要仪器和试剂 5-aza-dC购自Sigma公司，亚硫酸氢钠(NaHSO3)购自S9000 Sigma公司，细胞培养基(高糖DMEM，1640)购自Hyclone公司，TRIzol购自Invitrogen公司，Long Taq DNA聚合酶购自北京天根生物公司，反转录试剂盒购自MBI Fermentas公司；多通道PCR仪(PTC-220)购自MJ Research公司，凝胶电泳图像分析系统(Gel Doc 2000型)购自Bio-Rad公司 ......